BUNSEN本生帶妳分(fen)析影響(xiang)ELISA中非特(te)異(yi)性(xing)顯色的(de)原因(yin)

　　影響(xiang)ELISA中(zhong)非特(te)異(yi)性(xing)顯色的(de)原因(yin)很多(duo)，如(ru)試劑盒特(te)異(yi)性(xing)、檢驗標本中含(han)酶(mei)標記(ji)物(wu)的幹(gan)擾物(wu)，操作過(guo)程中(zhong)的問題。本文就這壹原因(yin)作壹簡(jian)要分析,以便(bian)可以(yi)通過(guo)以上(shang)措(cuo)施把(ba)非特(te)異(yi)顯(xian)色降(jiang)至(zhi)zui低(di)限(xian)度(du)，從(cong)而提高(gao)檢測的特(te)異(yi)性(xing)，並得到更準確、可靠(kao)的(de)實(shi)驗結果(guo)。

　　試劑盒特(te)異(yi)性(xing)因素

　　1. 固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)的選擇(ze)。ELISA中(zhong)常用(yong)的(de)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)有微(wei)量(liang)滴定板(ban)、小(xiao)珠(zhu)和小試管三種，以微(wei)量(liang)滴定板(ban)為常見(jian)。它(ta)具有良(liang)好(hao)的(de)吸附性能(neng)，孔(kong)底(di)透明度(du)高，空白(bai)值低(di)，各(ge)板(ban)之(zhi)間(jian)、同壹板(ban)各(ge)孔(kong)之(zhi)間(jian)性能(neng)相(xiang)近。聚苯(ben)乙烯(xi)ELISA板(ban)由(you)於(yu)原料的(de)不(bu)同(tong)和(he)制作(zuo)工(gong)藝(yi)的差(cha)別，各產(chan)品(pin)的(de)質(zhi)量(liang)差(cha)異很大。因(yin)此，在選擇試劑盒同(tong)時(shi)要(yao)對其使用(yong)的(de)微(wei)孔(kong)板(ban)型(xing)號(hao)進行(xing)認證(zheng)，評(ping)估(gu)。

　　2.包被(bei)物(wu)的純度。在酶(mei)聯免疫測定尤(you)其是間(jian)接ELISA中(zhong)，試劑的特(te)異(yi)性(xing)取(qu)決(jue)於(yu)使用(yong)抗(kang)原的(de)純度。目(mu)由(you)於(yu)技術條(tiao)件的限(xian)制，包(bao)被(bei)用(yong)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體(ti)的純度不(bu)可(ke)能(neng)達(da)到100%，所以(yi)有些(xie)非特(te)異(yi)性(xing)顯色不(bu)可(ke)避(bi)免，只能(neng)盡(jin)可能(neng)提高(gao)純度，提高(gao)特(te)異(yi)性(xing)。目使用(yong)的(de)包(bao)被(bei)抗(kang)原壹般(ban)為合(he)成多(duo)肽抗(kang)原。

　　3.包(bao)被(bei)抗(kang)體(ti)的效(xiao)價。具有高(gao)親和力(li)和高(gao)特(te)異(yi)性(xing)的包被(bei)抗(kang)體(ti)，是決定(ding)試劑特(te)異(yi)性(xing)的重要(yao)方面。

　　4 .封(feng)閉(bi)。是ELISA中重(zhong)要的(de)壹步(bu)，目的(de)是封閉(bi)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)表面(mian)尚未被(bei)所占據的(de)空隙(xi)[2]，減少後(hou)續(xu)步(bu)驟中(zhong)非特(te)異(yi)性(xing)蛋白(bai)的(de)幹(gan)擾。

　　檢驗標本中含(han)有酶(mei)標記(ji)物(wu)的幹(gan)擾物(wu)

　　1.內(nei)源性(xing)幹(gan)擾物(wu)：類風(feng)濕(shi)因子(RF)、黃(huang)疸(dan)等(deng)，類(lei)風(feng)濕(shi)因子是可作(zuo)用(yong)於(yu)多(duo)種動物(wu)以及人(ren)IgGFc段(duan)的自(zi)身抗(kang)體(ti)，多(duo)數(shu)為IgM類(lei)，能(neng)充當抗(kang)原成分(fen)與(yu)固(gu)相(xiang)及(ji)酶(mei)標抗(kang)體(ti)反應，從(cong)而呈(cheng)現(xian)非特(te)異(yi)性(xing)顯色。

　　黃(huang)疸(dan)血標本中常含(han)有(you)內(nei)源性(xing)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)，如(ru)用(yong)辣根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)為標記(ji)物(wu)，就有可能(neng)產生非特(te)異(yi)性(xing)顯色。

　　2 .外源性(xing)幹(gan)擾物(wu)，常常因(yin)樣(yang)品(pin)采(cai)集(ji)、貯(zhu)存、處(chu)理(li)不(bu)當(dang)造(zao)成如(ru)樣品(pin)溶(rong)血(xue)，被(bei)細菌汙(wu)染(ran)，標本凝集(ji)不(bu)全等(deng)。溶(rong)血(xue)標本，紅(hong)細胞溶(rong)解(jie)破(po)裂(lie)，釋放(fang)出(chu)血紅(hong)素形(xing)成，而(er)血紅(hong)素中(zhong)的鐵(tie)卟啉(lin)是過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)的類(lei)似物(wu)，以HRP為標記(ji)的ELISA測定中(zhong)，溶(rong)血標本可能(neng)會增加非特(te)異(yi)性(xing)顯色。如(ru)有細菌汙(wu)染(ran)，菌(jun)體(ti)中可能(neng)含有內(nei)源性(xing)HRP(辣根過(guo)氧化(hua)酶(mei))[2]，有國(guo)內(nei)報道酶(mei)免HAg試劑檢測溶血(xue)標本時可(ke)造(zao)成假(jia)陽性[3]。如(ru)在冰箱(xiang)中(zhong)保(bao)存過(guo)久，其中的(de)IgG可(ke)發生聚(ju)合，在間(jian)接法(fa)ELISA中(zhong)可(ke)使本底加(jia)深[2]。因此(ci)，血標本在采(cai)集(ji)處理(li)時(shi)應(ying)小(xiao)心(xin)，在冰箱(xiang)中(zhong)保(bao)存不(bu)易(yi)過(guo)久。

　　標本凝集(ji)不(bu)全時(shi)，血清中(zhong)會(hui)殘(can)留(liu)部分(fen)纖(xian)維蛋白(bai)原，也(ye)易(yi)造(zao)成假(jia)陽性。

　　操作過(guo)程中(zhong)的問題造(zao)成假(jia)陽性

　　1.加樣

　　對於(yu)間(jian)接ELISA標本壹般(ban)都(dou)要進行(xing)稀(xi)釋(shi)，如(ru)果加(jia)樣不(bu)準就會造(zao)成誤(wu)差(cha)，尤其當稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)大(da)時，很小的(de)絕(jue)對誤差(cha)，會導致較(jiao)大的(de)相(xiang)對誤差(cha)，使陰(yin)性(或弱(ruo)陽性)標本呈陽性(或陰(yin)性)。加樣(yang)時應將(jiang)所加物(wu)加在ELISA板(ban)孔(kong)的(de)底(di)部(bu)，避(bi)免加在孔(kong)壁(bi)上(shang)部(bu)，並註意不(bu)可(ke)濺(jian)出(chu)，不(bu)可(ke)產(chan)生(sheng)氣(qi)泡(pao)。目(mu)，大(da)部分血站(zhan)都已(yi)使用(yong)全自(zi)動酶(mei)免加樣系統處理(li)標本，可較(jiao)好(hao)地(di)避(bi)免以上誤差(cha)。

　　2.洗滌

　　在ELISA中正確(que)的洗(xi)滌是得到可重(zhong)復結果(guo)的關(guan)健壹步(bu)，應引(yin)起操作者重視(shi)。無論(lun)是手工(gong)操作還(hai)是機器操(cao)作(zuo)，得出(chu)不(bu)正(zheng)確(que)的(de)結果(guo)常與(yu)不(bu)正(zheng)確(que)的(de)洗滌有關(guan)，ELISA就是靠(kao)洗(xi)滌來達(da)到分離(li)遊(you)離(li)和(he)結合(he)的酶(mei)標記(ji)物(wu)的目的。通過(guo)洗滌(di)以消(xiao)除(chu)殘(can)留(liu)在板(ban)孔(kong)中(zhong)沒(mei)能(neng)與(yu)固(gu)體(ti)抗(kang)原或(huo)抗(kang)體(ti)結合(he)的物(wu)質，以及在反應過(guo)程中(zhong)非特(te)異(yi)性(xing)吸附於(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)的幹(gan)擾物(wu)質。

　　3 .溫育(yu)

　　每(mei)種試劑都有(you)其反應模(mo)式(shi)，其中溫度和(he)溫育(yu)時(shi)間(jian)控制是重要(yao)因素(su)。因(yin)孵(fu)育(yu)溫度高(gao)，反應時(shi)間(jian)長，會(hui)造(zao)成整(zheng)板(ban)本底高(gao)，陽性率高。溫育(yu)壹般(ban)用(yong)濕(shi)盒或(huo)水浴，反應板(ban)不(bu)宜(yi)疊(die)放，以各(ge)板(ban)溫度都(dou)能(neng)迅速(su)平(ping)衡(heng)，為避(bi)免蒸發(fa)，板(ban)上(shang)應(ying)加蓋(gai)。

　　4.酶(mei)標儀(yi)判讀(du)

　　作為記(ji)錄測定結果(guo)的儀(yi)器，酶(mei)標儀(yi)的性能(neng)穩定與(yu)否，決定(ding)結果(guo)的可靠(kao)度(du)。先(xian)酶(mei)標儀(yi)應定期(qi)進行(xing)保(bao)養，對濾光(guang)片(pian)要(yao)定期校(xiao)正(zheng);其次酶(mei)標儀(yi)波長設(she)置要(yao)正(zheng)確，使用(yong)雙(shuang)波(bo)長(chang)，壹個(ge)檢測波長(chang)，壹個(ge)參(can)比波(bo)長，以(yi)消(xiao)除(chu)微(wei)孔(kong)板(ban)底(di)部(bu)劃痕、不(bu)平(ping)、指印或(huo)液(ye)面高(gao)度(du)差(cha)異造(zao)成的(de)光(guang)幹(gan)擾。此外，在用(yong)酶(mei)標儀(yi)讀數(shu)時(shi)先(xian)擦試微(wei)孔(kong)板(ban)底(di)部(bu)並壓平(ping)板(ban)條(tiao)。由(you)於(yu)各種酶(mei)標儀(yi)性能(neng)有所不(bu)同(tong)，使用(yong)中(zhong)應(ying)詳細閱讀(du)說明書

　　標簽(qian)：BUNSEN本生 ELISA試劑盒 試劑盒 試劑 本生 抗(kang)原 抗(kang)體(ti) 微(wei)量(liang)滴定板(ban)

　　ELISA試劑盒 本生壹直(zhi)視質(zhi)量(liang)控制為企(qi)業(ye)的(de)生(sheng)命(ming)，追求(qiu)企(qi)業(ye)競(jing)爭力的(de)不(bu)斷提升(sheng)。公司在經營中(zhong)始終秉承：遵(zun)紀(ji)守法，嚴於(yu)律己(ji)，寬(kuan)仁(ren)以(yi)待(dai)，敢(gan)於(yu)承擔(dan)的(de)企(qi)業(ye)精(jing)神(shen)作(zuo)為標準，以過(guo)硬的質量和優良(liang)的服務(wu)來維護(hu)和拓(tuo)展(zhan)市場(chang)，較(jiao)大限(xian)度(du)的(de)滿(man)足客戶的(de)需(xu)求(qiu)。與(yu)客戶的(de)共(gong)贏(ying)，是我(wo)們的(de)發展(zhan)目標。本生!您(nin)信任的(de)合(he)作(zuo)夥伴。我(wo)們願(yuan)與(yu)您真(zhen)誠合作，共創(chuang)美(mei)好(hao)的(de)未來。