問(wen)題(ti)分(fen)析(xi)：超濾離心(xin)管(guan)常(chang)見問(wen)題(ti)

　　結(jie)果(guo)分(fen)析(xi)：

　　1. 蛋(dan)白在(zai)濃(nong)縮(suo)時(shi)出現(xian)了沈澱(dian)為(wei)什麽(me)?

　　蛋(dan)白(bai)如(ru)果(guo)濃(nong)縮(suo)過(guo)快或(huo)者(zhe)過度(du)濃(nong)縮(suo)都有可(ke)能引起(qi)蛋白沈澱(dian)。建(jian)議蛋白(bai)濃(nong)縮(suo)後(hou)的(de)最(zui)終(zhong)濃(nong)度(du)不超過20mg/ml. 對(dui)於(yu)對(dui)濃(nong)縮(suo)速(su)度(du)敏感(gan)而容易(yi)沈澱(dian)的(de)蛋(dan)白(bai)，建(jian)議的(de)改(gai)進方(fang)法是：

　　1)離(li)心(xin)力(li)降(jiang)為(wei)推薦(jian)離心(xin)力(li)的(de)30%-50%。

　　2)改(gai)選(xuan)擇下(xia)壹(yi)級過濾裝(zhuang)置(zhi)(如(ru)原(yuan)本選(xuan)用10K，此(ci)時可(ke)以選(xuan)擇30K)

　　3)在(zai)濃(nong)縮(suo)過(guo)程中，取出超濾管，用槍頭(tou)反復(fu)吹吸(xi)幾(ji)次(ci)。

　　2. 濃(nong)縮(suo)後(hou)發現(xian)濃(nong)縮(suo)液(ye)中沒有(you)目的(de)蛋(dan)白(bai)，可(ke)能的(de)原(yuan)因(yin)是(shi)?

　　首(shou)先，超濾管的(de)起(qi)始(shi)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)為25ug/ml.

　　請(qing)確保樣本的(de)起(qi)始(shi)濃(nong)度(du)大於(yu)這(zhe)個(ge)濃(nong)度(du)。

　　其次(ci)，如(ru)果(guo)問(wen)題(ti)仍(reng)然出現(xian)。

　　請(qing)不要丟棄您(nin)的(de)樣(yang)本濾過液(ye)，

　　以做(zuo)下壹(yi)步分(fen)析(xi)：

　　1)如(ru)果(guo)樣(yang)本在(zai)濾過液(ye)中，那麽(me)請(qing)排(pai)查：

　　a) 是否(fou)選(xuan)擇了合適截留(liu)分(fen)子(zi)量的(de)超濾管(目的(de)蛋(dan)白(bai)分(fen)子(zi)量的(de)1/2或(huo)者(zhe)1/3)?

　　b) 使用的(de)離(li)心(xin)力(li)是(shi)否(fou)是(shi)在(zai)最(zui)高(gao)範圍(wei)內?如(ru)果(guo)使(shi)用的(de)是(shi)rpm，請(qing)換(huan)算成(cheng)相(xiang)應(ying)的(de)g離(li)心(xin)，

　　c) 離(li)心(xin)機最(zui)近(jin)是否有校準(zhun)過(guo)?

　　d) 是否嘗(chang)試這個(ge)蛋白(bai)?如(ru)果(guo)能確保用同樣(yang)的(de)超濾管對(dui)其(qi)他蛋白(bai)成功(gong)操(cao)作的(de)話(hua)， 那(na)麽(me)有(you)可(ke)能是目的(de)蛋(dan)白(bai)的(de)原(yuan)因(yin)。有(you)時(shi)蛋白會因(yin)其(qi)本身的(de)壹(yi)些(xie)特(te)性(構(gou)象差異(yi))而影響(xiang)濃(nong)縮(suo)效果，建議選(xuan)用上(shang)壹分(fen)子(zi)量級別的(de)超濾管(如(ru)原(yuan)本選(xuan)用30K，此(ci)時可(ke)以選(xuan)擇 10K)。

　　2)如(ru)果(guo)樣(yang)本也不在(zai)濾過液(ye)中：

　　a) 樣本起始(shi)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)是否(fou)大於(yu)25ug/ml?

　　b) 用來確(que)定(ding)樣(yang)本濃(nong)度(du)的(de)方(fang)法是什麽(me)?是(shi)否(fou)可信(xin)?

　　c) 目的(de)蛋(dan)白(bai)是(shi)不(bu)是沈澱(dian)了?如(ru)果(guo)是(shi)，具(ju)體(ti)解決方(fang)法請參(can)考(kao)上(shang)面(mian)的(de)關(guan)於(yu)蛋(dan)白沈澱(dian)的(de)相(xiang)關(guan)解(jie)決方(fang)法。

　　3.用濃(nong)縮(suo)後(hou)的(de)蛋(dan)白(bai)做(zuo)下遊(you)分(fen)析(xi)時(shi)發現有幹擾(rao)，可(ke)能原(yuan)因(yin)?

　　裝(zhuang)置(zhi)的(de)超過濾薄膜含(han)有微量甘油。如(ru)果(guo)此(ci)材(cai)料(liao)幹擾(rao)分(fen)析(xi)，可(ke)用緩沖(chong)液(ye)或超純水(shui)預清(qing)洗。如(ru)果(guo)幹擾(rao)仍(reng)然存(cun)在(zai)，用0.1 N NaOH清洗，然後(hou)用緩沖(chong)液(ye)或Milli-Q® 水(shui)再(zai)次(ci)清(qing)洗後(hou)甩(shuai)幹。

　　4. 有(you)時(shi)候(hou)用超濾離心(xin)管(guan)連(lian)水(shui)都離不(bu)下(xia)來，可能原(yuan)因(yin)?

　　裝(zhuang)置(zhi)的(de)超過濾薄膜含(han)有微量甘油。如(ru)果(guo)出現(xian)這(zhe)種情(qing)況，先(xian)用0.1 N NaOH清洗再(zai)離(li)心(xin)。最(zui)後(hou)用緩沖(chong)液(ye)或Milli-Q®水(shui)再(zai)次(ci)清(qing)洗後(hou)甩(shuai)幹。清(qing)洗後(hou)的(de)濾膜應(ying)立即使(shi)用， 如(ru)暫(zan)時(shi)不用，請保持潤(run)濕狀態(tai)，避(bi)免重新幹燥(zao)。

　　5.使(shi)用超濾管對(dui)蛋(dan)白(bai)進行濃(nong)縮(suo)的(de)過(guo)程中懷疑目的(de)蛋(dan)白(bai)和(he)膜之間可能存(cun)在(zai)非特(te)異(yi)性(xing)吸(xi)附，如(ru)何(he)改(gai)善(shan)這壹(yi)現象?

　　超濾管使用的(de)是(shi)再(zai)生(sheng)纖(xian)維素膜的(de)材(cai)質，擁有極低(di)的(de)蛋(dan)白(bai)吸(xi)附能力。但(dan)是對(dui)於(yu)壹(yi)些(xie)疏(shu)水(shui)性蛋(dan)白或非極(ji)性(xing)蛋(dan)白，它(ta)們(men)和(he)膜的(de)非特(te)異(yi)吸(xi)附可能會增強，對(dui)於(yu)這(zhe)種情況，客戶可(ke)以嘗(chang)試在(zai)實驗(yan)前對(dui)超濾管進行封閉處理(li)，詳(xiang)細(xi)步驟(zhou)可(ke)聯(lian)系廠(chang)家(jia)技術(shu)支(zhi)持。

　　同時也可建(jian)議換成(cheng)Amicon Ultra 0.5來(lai)進行實(shi)驗(yan)，通過減小膜面(mian)積(ji)來(lai)降(jiang)低(di)非特(te)異(yi)性(xing)吸(xi)附。

　　超濾離心(xin)管(guan) 本生(sheng)壹(yi)直視(shi)質量控制(zhi)為(wei)企(qi)業(ye)的(de)生(sheng)命(ming)，追(zhui)求(qiu)企(qi)業(ye)競(jing)爭(zheng)力(li)的(de)不(bu)斷提升。公(gong)司(si)在(zai)經營中始(shi)終(zhong)秉承(cheng)：遵(zun)紀守(shou)法，嚴(yan)於(yu)律(lv)己(ji)，寬仁(ren)以(yi)待，敢(gan)於(yu)承(cheng)擔(dan)的(de)企(qi)業(ye)精(jing)神作為(wei)標(biao)準(zhun)，以(yi)過硬的(de)質量和優(you)良的(de)服(fu)務來(lai)維護和拓展市場(chang)，較(jiao)大限(xian)度(du)的(de)滿(man)足客戶的(de)需(xu)求(qiu)。與客戶的(de)共(gong)贏，是我們(men)的(de)發(fa)展目標(biao)。本生(sheng)!您(nin)信(xin)任(ren)的(de)合作夥(huo)伴。我們(men)願(yuan)與您真(zhen)誠(cheng)合作，共(gong)創(chuang)美好(hao)的(de)未(wei)來。本生(sheng)離(li)心(xin)管(guan)