ELISA實(shi)驗(yan)：哪些因素(su)會(hui)導致(zhi)ELISA實(shi)驗(yan)的(de)假陽(yang)性

　　ELISA法對(dui)IgG、IgM都(dou)有很好(hao)的(de)檢測能(neng)力(li)，因其(qi)靈(ling)敏(min)度高，價(jia)格(ge)低廉，操作(zuo)方(fang)便，結(jie)果客(ke)觀(guan)，在(zai)實(shi)驗(yan)室廣泛(fan)應用(yong)，但(dan)在(zai)工(gong)作(zuo)中(zhong)遇(yu)到的(de)zui大(da)的(de)問(wen)題是出現假(jia)陽(yang)性的(de)問(wen)題。影(ying)響(xiang)因素(su)除(chu)了(le)方(fang)法學(xue)、試劑(ji)盒本(ben)身(shen)之外(wai),還有(you)標本(ben)處(chu)理、操作(zuo)不(bu)當(dang)等多(duo)種因素(su)，雙(shuang)試劑(ji)兩組(zu)結(jie)果進行(xing)配對(dui)t檢(jian)驗，差異(yi)(P>0.05)均無(wu)統計學(xue)意義(yi)。

　　多(duo)種因素(su)可(ke)能(neng)會(hui)導致(zhi)ELISA法本(ben)底(di)偏(pian)高。出現灰(hui)值，除(chu)了(le)嚴格(ge)操作(zuo)、做好質(zhi)控外(wai)，對(dui)可(ke)疑假陽(yang)性的(de)標本(ben)壹(yi)定(ding)要(yao)認真(zhen)復(fu)測。為避(bi)免假(jia)陽(yang)性結(jie)果的(de)出現現(xian)將(jiang)產生(sheng)假(jia)陽(yang)性的(de)原因分析(xi)如(ru)下(xia)：

　　1、內源(yuan)性因素(su)

　　(1)年(nian)齡(ling)因素(su)

　　老(lao)年人容易(yi)出現免(mian)疫功(gong)能(neng)異(yi)常(chang)，產生(sheng)壹(yi)些(xie)異(yi)常(chang)蛋白質幹(gan)擾了(le)檢(jian)測的(de)結(jie)果出現假(jia)陽(yang)性。

　　(2)疾(ji)病(bing)因素(su)

　　類風(feng)濕關(guan)節(jie)炎、紅斑(ban)狼(lang)瘡(chuang)、糖尿(niao)病(bing)、自(zi)身(shen)免(mian)疫性疾(ji)病(bing)等可使(shi)患(huan)者體(ti)內含(han)有嗜異(yi)性抗體(ti)，自(zi)身(shen)抗(kang)體(ti)、類風(feng)濕因子等(deng)，這(zhe)些特殊成(cheng)分在(zai)反(fan)應(ying)過程中有壹(yi)定(ding)的(de)吸附(fu)作(zuo)用(yong)，多為體內某(mou)些抗(kang)原(yuan)物(wu)質(zhi)幹(gan)擾所(suo)致產(chan)生(sheng)假(jia)的(de)顯色(se)反應(ying)而出現假(jia)陽(yang)性。

　　2、標本(ben)因素(su)

　　(1)標本(ben)處(chu)理不(bu)chedi

　　血液(ye)抽出後未wan全(quan)凝固(gu)而離(li)心分(fen)離(li)血清(qing)不(bu)能(neng)使(shi)纖(xian)維(wei)蛋白原wan全(quan)析(xi)出，加(jia)樣(yang)後板孔(kong)中形成(cheng)纖維(wei)蛋白薄(bo)膜(mo)或(huo)絮(xu)狀物(wu)，造成(cheng)洗(xi)板(ban)不(bu)che底(di)幹凈(jing)，酶殘(can)留(liu)在(zai)反(fan)應(ying)孔(kong)中，使(shi)反(fan)應(ying)孔(kong)吸光(guang)度值(zhi)偏(pian)高，出現假(jia)陽(yang)性，待(dai)測血清(qing)中混(hun)有纖(xian)維(wei)蛋白原，這(zhe)種物質易(yi)沈(chen)澱或(huo)附(fu)著在(zai)聚(ju)乙(yi)烯(xi)空(kong)內不(bu)易洗(xi)凈(jing)，試驗表明在(zai)較(jiao)高的(de)離(li)心轉(zhuan)速(su)(3000/min)和(he)較(jiao)長的(de)離(li)心時(shi)間(jian)(>10/min)之上，血液(ye)標本(ben)被(bei)充分(fen)地離(li)心分(fen)離(li)後，使紅(hong)細(xi)胞(bao)和纖(xian)維(wei)蛋白充分(fen)沈澱(dian)，可以(yi)在(zai)加(jia)樣(yang)時(shi)避(bi)免(mian)加(jia)入這兩(liang)種幹擾物質對(dui)試驗結(jie)果的(de)影(ying)響(xiang)。

　　(2)標本(ben)溶血

　　標本(ben)溶血時(shi)細(xi)胞(bao)內液(ye)的(de)各種活(huo)性酶以(yi)及具(ju)有酶活(huo)性的(de)物質(zhi)與底(di)物非(fei)特異(yi)性結(jie)合(he)，洗(xi)滌(di)時(shi)不(bu)易洗(xi)去(qu)，催化(hua)底(di)物產(chan)生(sheng)壹(yi)定(ding)的(de)顯色(se)反應(ying)，使本(ben)底(di)吸光(guang)度值(zhi)偏(pian)高形成(cheng)假陽(yang)性。

　　(3)細菌汙(wu)染(ran)

　　標本(ben)放(fang)置(zhi)、處置(zhi)不(bu)當(dang)被(bei)細(xi)菌汙(wu)染(ran)，壹(yi)些(xie)細(xi)菌體(ti)內可(ke)能(neng)含(han)有(you)內源(yuan)性辣(la)根(gen)過氧化(hua)物酶會(hui)對(dui)相應的(de)酶做標記(ji)的(de)測定方(fang)法產(chan)生(sheng)非(fei)特異(yi)性幹擾，造成(cheng)弱的(de)假陽(yang)性反應(ying)。

　　3、操作(zuo)因素(su)

　　聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯(xi)因其(qi)具(ju)有較長的(de)吸附(fu)蛋白質的(de)性能(neng)而被(bei)廣(guang)泛(fan)用(yong)於(yu)ELISA試驗的(de)固(gu)相載體，聚苯(ben)乙(yi)烯(xi)等(deng)塑料(liao)對(dui)蛋白質的(de)吸附(fu)是普遍(bian)性的(de)，因此需(xu)要(yao)通(tong)過洗(xi)滌(di)清(qing)楚(chu)在(zai)反(fan)應(ying)過程中，非特異(yi)性地吸附(fu)於(yu)固(gu)相載體的(de)幹擾物質，洗(xi)滌(di)在(zai)ELISA過程中雖不(bu)是壹(yi)個(ge)反(fan)應步(bu)驟，但卻(que)決(jue)定著試驗的(de)成(cheng)敗，可以(yi)在(zai)加(jia)樣(yang)前(qian)離(li)心時(shi)得(de)以(yi)控制(zhi)，BUNSEN本(ben)生(sheng)試劑(ji)盒 同樣(yang)也(ye)可以(yi)通(tong)過適當(dang)增加(jia)洗(xi)滌(di)的(de)次(ci)數和(he)浸泡(pao)時(shi)間(jian)減(jian)輕或(huo)避免(mian)對(dui)試驗結(jie)果的(de)影(ying)響(xiang)，同樣(yang)對(dui)於(yu)血(xue)液(ye)存在(zai)的(de)非特異(yi)性的(de)lgG的(de)樣(yang)本(ben)很難(nan)在(zai)加(jia)樣(yang)時(shi)將(jiang)其(qi)去(qu)除(chu)，那麽解(jie)決(jue)的(de)時(shi)機就是洗(xi)滌(di)過程。

　　(1)加(jia)樣(yang)太(tai)快，加(jia)樣(yang)時(shi)加(jia)在(zai)孔(kong)壁上或(huo)有氣泡(pao)。

　　(2)底(di)物液(ye)反復使用被(bei)汙(wu)染(ran)或(huo)被(bei)強光(guang)照(zhao)射時(shi)間(jian)過長。

　　(3)板(ban)要(yao)平(ping)整(zheng)，尤(you)其(qi)是在(zai)洗(xi)板(ban)機洗(xi)板(ban)的(de)過程中,往往是3排壹(yi)起(qi)洗(xi)，如(ru)果板不(bu)平(ping),就(jiu)很可(ke)能(neng)造(zao)成(cheng)洗(xi)液(ye)有殘(can)留(liu)，從而導致(zhi)非(fei)特異(yi)性結(jie)合(he)不(bu)能(neng)清(qing)除(chu)幹凈(jing)，對(dui)實(shi)驗(yan)結(jie)果造成(cheng)幹擾。

　　(4)洗(xi)液(ye)溫度 實(shi)驗(yan)表明:洗(xi)液(ye)溫度也(ye)會影(ying)響(xiang)洗(xi)板(ban)的(de)幹凈(jing)程度，尤(you)其(qi)是冬天溫度過低時(shi)容易(yi)出現“花(hua)板(ban)"問(wen)題，因此，需(xu)保(bao)持(chi)在(zai)室(shi)溫在(zai)20-30℃。

　　洗(xi)液(ye)未註滿孔(kong)，孔(kong)壁洗(xi)滌(di)不(bu)幹凈(jing)也(ye)易(yi)造成(cheng)假陽(yang)性現象(xiang)。

　　(5)洗(xi)液(ye)要(yao)新鮮配置(zhi)，洗(xi)液(ye)要(yao)臨用(yong)前(qian)新鮮配置(zhi)，放(fang)置(zhi)時(shi)間(jian)過長易(yi)產生(sheng)絮(xu)狀物(wu)或(huo)渾濁(zhuo)，造(zao)成(cheng)賭孔(kong)導致(zhi)假(jia)陽性。

　　洗(xi)板(ban)次(ci)數不(bu)夠(gou)或(huo)洗(xi)滌(di)間(jian)隔(ge)時(shi)間(jian)過短也會(hui)造成(cheng)由於(yu)洗(xi)板(ban)不(bu)凈而造成(cheng)假陽(yang)性，孵育時(shi)間(jian)過長也(ye)會造(zao)成(cheng)假陽(yang)性;由於(yu)樣(yang)本(ben)較(jiao)多，加(jia)樣(yang)後未及時(shi)放(fang)入孵育箱(xiang)，反(fan)應板(ban)在(zai)室(shi)溫呆(dai)的(de)時(shi)間(jian)過長，既間(jian)接(jie)增(zeng)加(jia)了(le)孵(fu)育時(shi)間(jian)，導致(zhi)孵(fu)育時(shi)間(jian)過長。

　　4、儀(yi)器因素(su)

　　(1)酶標儀(yi)是垂(chui)直對(dui)反(fan)應孔(kong)比色(se)，反(fan)應(ying)孔(kong)底(di)部汙(wu)染(ran)時(shi)，出現反(fan)應(ying)孔(kong)吸光(guang)度值(zhi)偏(pian)高。

　　(2)洗(xi)板(ban)拖(tuo)尾(wei)現(xian)象(xiang)，洗(xi)板(ban)機在(zai)洗(xi)板(ban)過程中，出水(shui)針出水(shui)不(bu)暢，滴(di)滴(di)答(da)答不(bu)間斷(duan)出現水(shui)滴，造(zao)成(cheng)板上水(shui)過多，拍(pai)板不(bu)幹凈(jing)。

　　5、方(fang)法學(xue)因素(su)

　　(1)廠(chang)家(jia)試劑(ji)盒，BUNSEN本(ben)生(sheng)試劑(ji)盒 由於(yu)不(bu)同廠(chang)家(jia)的(de)診斷(duan)試劑(ji)所(suo)包(bao)被(bei)的(de)抗原(yuan)配比以(yi)及抗(kang)原純(chun)度不(bu)盡壹(yi)致(zhi)，造(zao)成(cheng)靈敏(min)度和(he)特異(yi)性不(bu)同，因此也(ye)造(zao)成(cheng)了(le)假(jia)陽性的(de)產生(sheng)。三(san)代(dai)免疫試劑(ji)盒只檢測抗體(ti)，被(bei)某(mou)些(xie)身(shen)體(ti)不(bu)明抗原(yuan)幹擾，導致(zhi)的(de)假陽(yang)性。

　　(2)實(shi)驗(yan)灰(hui)區，在(zai)陽(yang)性與陰性之間(jian)有(you)壹(yi)條(tiao)明顯的(de)分界(jie)線，作(zuo)為(wei)陽性判定(ding)值(zhi)(cutoff)來(lai)判定(ding)結(jie)果，壹(yi)般把檢(jian)測值S/COV值(zhi)在(zai)0.6-1範(fan)圍(wei)內時(shi)作(zuo)為(wei)灰(hui)區帶(dai)，因此當(dang)1

　　(3)“鉤狀(zhuang)效應"的(de)產生(sheng)，需(xu)對(dui)標本(ben)進行(xing)稀釋(shi)重復檢測。

　　(4)酶標儀(yi)的(de)波長選(xuan)擇，建(jian)議(yi)酶標儀(yi)比色時(shi)選(xuan)擇(ze)雙(shuang)波長，即(ji)敏(min)感(gan)波(bo)長(主波(bo)長)和(he)非敏(min)感(gan)幹(gan)擾波長(次(ci)波長)，zui後從儀(yi)器上得到(dao)的(de)讀數(shu)為敏(min)感(gan)波(bo)長與(yu)非敏(min)感(gan)幹(gan)擾波長之差(cha)，排除(chu)(板孔(kong)的(de)劃痕(hen)、汙跡(ji))幹擾。

　　ELISA試劑(ji)盒 本(ben)生(sheng)壹(yi)直視(shi)質量(liang)控制(zhi)為企業的(de)生(sheng)命(ming)，追求企業競(jing)爭力的(de)不(bu)斷(duan)提升。公(gong)司(si)在(zai)經營中始終(zhong)秉(bing)承(cheng)：遵紀守(shou)法，嚴於(yu)律(lv)己(ji)，寬仁(ren)以(yi)待(dai)，敢於(yu)承(cheng)擔的(de)企業精神作(zuo)為(wei)標準(zhun)，以(yi)過硬的(de)質量(liang)和優(you)良的(de)服務(wu)來維(wei)護和(he)拓(tuo)展(zhan)市(shi)場，較大(da)限度的(de)滿足客(ke)戶(hu)的(de)需求。與(yu)客(ke)戶(hu)的(de)共贏，是我們(men)的(de)發展(zhan)目(mu)標。本(ben)生(sheng)!您(nin)信(xin)任(ren)的(de)合(he)作(zuo)夥(huo)伴(ban)。我(wo)們(men)願(yuan)與(yu)您(nin)真(zhen)誠(cheng)合(he)作(zuo)，共創美好(hao)的(de)未來(lai)。