本生(sheng)課堂(tang)：使用PCR板時防止(zhi)錯誤(wu)的五大技(ji)巧

　　聚合(he)酶(mei)鏈(lian)式(shi)反(fan)應 (PCR) 是(shi)生(sheng)命(ming)科(ke)學(xue)實驗(yan)室中(zhong)廣(guang)為(wei)人知的方(fang)法(fa)之(zhi)壹。PCR 板由(you)的塑料(liao)制(zhi)成(cheng)，可(ke)對收集(ji)的樣品(pin)或結果(guo)進(jin)行出色(se)的處理(li)和分(fen)析。它們(men)具(ju)有薄而(er)均(jun)勻的壁，可(ke)提供精(jing)確(que)的熱傳遞(di)。在(zai)為(wei)實(shi)時應用(yong)做準備(bei)時，DNA 或 RNA 的微(wei)小(xiao)部(bu)分(fen)被(bei)隔離(li)並儲存(cun)在(zai) PCR 板中(zhong)。PCR 板在(zai)熱封(feng)方(fang)面非(fei)常(chang)有效(xiao)，並且還限(xian)制(zhi)了(le)熱量的流動(dong)。然(ran)而，由於 PCR 板有效(xiao)且可(ke)靠(kao)，在(zai)處理(li)樣品(pin)時容(rong)易(yi)出錯和(he)不(bu)準確(que)。因(yin)此(ci)，如果您(nin)有興(xing)趣獲得優(you)質(zhi)的PCR板。最(zui)好聯系(xi)可靠(kao)的 PCR 板制(zhi)造(zao)商(shang)。有了這(zhe)個(ge)，您(nin)可(ke)以確(que)保(bao)獲(huo)得的價格(ge)。以下是(shi)壹些(xie)註意(yi)事項(xiang)，可(ke)避(bi)免試劑(ji)或(huo)樣(yang)品(pin)受(shou)到(dao)汙染，並(bing)防(fang)止(zhi)結果(guo)不(bu)準確(que)。

　　對環(huan)境進行消(xiao)毒(du):

　　由(you)於存在(zai)雜質(zhi)，會出現(xian)不(bu)正(zheng)確(que)的陽(yang)性(xing)或(huo)陰性(xing)結果(guo)，這(zhe)會讓您懷(huai)疑結果(guo)。

　　雜(za)質(zhi)和汙染物以各種形式(shi)出現(xian)，例(li)如不(bu)相關的 DNA 或化(hua)學(xue)添加(jia)劑(ji)，最(zui)終(zhong)會降低反(fan)應的效(xiao)率(lv)和(he)有效(xiao)性。

　　有許(xu)多(duo)方(fang)法(fa)可(ke)以大大降低 PCR 板的汙染率(lv)。

　　使用已滅菌的濾芯(xin)吸頭是(shi)另(ling)壹種(zhong)防(fang)止(zhi)雜質(zhi)通(tong)過移(yi)液(ye)器進(jin)入樣品的有用方(fang)法(fa)。

　　提供壹套幹凈(jing)的設備(bei)，包(bao)括移(yi)液(ye)器和(he)架子，專(zhuan)門(men)用於 PCR。這(zhe)將(jiang)保(bao)證(zheng)實(shi)驗(yan)室周(zhou)圍的雜質(zhi)或汙染物轉移(yi)可忽(hu)略(lve)不(bu)計。

　　在(zai)移(yi)液(ye)器、架子和長(chang)凳上(shang)使用漂白(bai)劑(ji)、乙(yi)醇來擦(ca)去(qu)汙染物。

　　為(wei)所(suo)有 PCR 反應(ying)分(fen)配(pei)預留空(kong)間(jian)，以進壹步(bu)減(jian)少顆(ke)粒汙染。

　　在(zai)每壹步(bu)都使用幹凈(jing)的手套並經(jing)常(chang)更換。

　　PCR 板

　　檢(jian)查(zha)模板的濃度和(he)純度。

　　應保持(chi)使用 PCR 分析樣(yang)品(pin)時使用的工作臺(tai)和(he)設備(bei)的清潔(jie)度。在(zai)分析(xi)和處理(li)之前驗(yan)證(zheng)樣(yang)品(pin)的純度(du)至關重要(yao)。

　　通(tong)常，分析儀會考(kao)慮 DNA 樣本的濃度和(he)純度水平。

　　爭(zheng)取(qu)260nm/280nm的吸光度(du)比(bi)不(bu)得小(xiao)於1.8。而隨後使用 230nm 和 320nm 之間(jian)的波長(chang)來(lai)識(shi)別(bie)雜(za)質(zhi)。

　　在(zai)壹個(ge)例(li)子中(zhong)，離(li)液(ye)鹽(yan)和(he)其(qi)他(ta)有機(ji)化(hua)合物在(zai) 230nm 的吸收率(lv)下(xia)被(bei)檢(jian)測到(dao)。同(tong)時在(zai) 320nm 的吸光度(du)下(xia)檢(jian)測和(he)驗(yan)證(zheng) DNA 樣(yang)品(pin)中(zhong)的濁度。

　　避(bi)免 PCR 板與(yu)產品過(guo)載：

　　盡(jin)管(guan)希(xi)望(wang)同時運(yun)行多個產品，但(dan)它會導致 PCR 板的交叉(cha)汙染。

　　用(yong)不(bu)同的產品使 PCR 板超(chao)載會浪(lang)費(fei)，並且很(hen)難確(que)定(ding)樣(yang)品(pin)。

　　保留等(deng)分 PCR 試劑(ji)的記(ji)錄：

　　連(lian)續冷(leng)凍/解凍(dong)循(xun)環(huan)和(he)頻繁使用等分可(ke)能會通(tong)過重結晶(jing)損壞(huai) PCR 試劑(ji)、酶(mei)和(he) DNTP。

　　在(zai)準備(bei)要(yao)分(fen)析(xi)的樣品(pin)時，始(shi)終努(nu)力(li)監控(kong)使用的等分(fen)試樣的速(su)率(lv)。

　　優(you)選(xuan)的 LIMS 更適(shi)合控(kong)制(zhi)試劑(ji)和(he)樣(yang)品(pin)冷凍或解凍(dong)的庫存(cun)和數(shu)量。

　　選(xuan)擇最(zui)佳(jia)退火溫(wen)度。

　　選(xuan)擇和(he)使用錯誤(wu)的退火溫(wen)度是(shi)另(ling)壹種(zhong)方(fang)法(fa) PCR 結果(guo)包(bao)含錯誤(wu)。

　　有時，反應(ying)並(bing)沒有按計劃(hua)進行。需要(yao)降(jiang)低退火溫(wen)度以促進成功(gong)的反應(ying)。

　　然(ran)而，降低溫(wen)度會增加假(jia)陽(yang)性(xing)和(he)引(yin)物二聚(ju)體出現(xian)的機(ji)會。

　　在(zai)使用 PCR 板時，確(que)認(ren)熔解曲(qu)線(xian)的分析(xi)具(ju)有重要(yao)意(yi)義，因(yin)為(wei)它是(shi)選(xuan)擇正(zheng)確(que)退火溫(wen)度的良(liang)好指(zhi)標(biao)。

　　引(yin)物設計軟(ruan)件輔(fu)助設計，提供正(zheng)確(que)的退火溫(wen)度，直(zhi)接(jie)減少(shao) PCR 板中(zhong)的錯誤(wu)。

　　PCR板本生(sheng)壹直(zhi)視(shi)質(zhi)量控(kong)制(zhi)為(wei)企業(ye)的生(sheng)命(ming)，追求(qiu)企業(ye)競(jing)爭(zheng)力(li)的不(bu)斷(duan)提升。公(gong)司(si)在(zai)經營中(zhong)始(shi)終秉(bing)承(cheng)：遵紀(ji)守(shou)法(fa)，嚴於律己，寬(kuan)仁以待(dai)，敢(gan)於承(cheng)擔的企業(ye)精(jing)神(shen)作為(wei)標(biao)準，以過硬(ying)的質(zhi)量和優良(liang)的服(fu)務(wu)來維護和(he)拓展市(shi)場(chang)，較(jiao)大(da)限度的滿足(zu)客(ke)戶(hu)的需求(qiu)。與(yu)客(ke)戶(hu)的共贏，是(shi)我們(men)的發展目(mu)標(biao)。本生(sheng)!您信(xin)任(ren)的合作夥(huo)伴(ban)。我(wo)們(men)願(yuan)與(yu)您(nin)真(zhen)誠(cheng)合(he)作，共創美好的未(wei)來(lai)。