ELISA實驗：ELISA溫(wen)育(yu)時(shi)間(jian)、選擇(ze)、操作註(zhu)意事(shi)項(xiang)?

　　在ELISA中(zhong)壹般(ban)有(you)兩(liang)次抗(kang)原抗(kang)體(ti)反(fan)應，即加樣本(ben)和加(jia)酶結(jie)合(he)物(wu)後。抗(kang)原抗(kang)體(ti)反(fan)應的(de)完成(cheng)需(xu)要(yao)有(you)壹(yi)定的(de)溫(wen)度(du)和時(shi)間，這(zhe)壹保(bao)溫(wen)過(guo)程稱(cheng)為溫(wen)育(yu)(incubation)，有(you)人(ren)稱(cheng)之(zhi)為孵育(yu)。

　　溫(wen)育(yu)時(shi)間(jian)：

　　溫(wen)育(yu)這(zhe)壹步是ELISA測(ce)定(ding)中(zhong)最容(rong)易(yi)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)的(de)步驟(zhou)。目前市面(mian)上的(de)商(shang)品(pin)化試(shi)劑(ji)盒的(de)反應(ying)溫(wen)育(yu)時(shi)間(jian)壹般(ban)為30~120分(fen)鐘，溫(wen)育(yu)時(shi)間(jian)若不(bu)夠，可能(neng)會(hui)影響測(ce)定(ding)下限(xian)。

　　ELISA屬(shu)固(gu)相(xiang)免疫(yi)測(ce)定(ding)，抗(kang)原、抗(kang)體(ti)的(de)結(jie)合(he)只(zhi)在固(gu)相(xiang)表(biao)面(mian)上發生(sheng)。以(yi)抗(kang)體(ti)包被(bei)的(de)夾心(xin)法(fa)為例，加(jia)入(ru)板(ban)孔(kong)中(zhong)的(de)標本(ben)，其(qi)中(zhong)的(de)抗(kang)原並(bing)不(bu)是都(dou)有(you)均(jun)等的(de)和固(gu)相(xiang)抗(kang)結(jie)合(he)的(de)機(ji)會(hui)，只(zhi)有(you)最(zui)貼(tie)近(jin)孔(kong)壁的(de)壹層溶液(ye)中(zhong)的(de)抗(kang)原直(zhi)接(jie)與抗(kang)體(ti)接(jie)觸。這(zhe)是壹個逐(zhu)步平(ping)衡(heng)的(de)過(guo)程，因此(ci)需經擴散才能(neng)達到反應的(de)終(zhong)點(dian)。在其(qi)後加(jia)入(ru)的(de)酶標記(ji)抗(kang)體(ti)與固(gu)相(xiang)抗(kang)原的(de)結(jie)合(he)也(ye)同樣如(ru)此(ci)。這(zhe)就(jiu)是為什麽ELISA反(fan)應總(zong)是需(xu)要(yao)壹定時間的(de)溫(wen)育(yu)。

　　在壹定溫(wen)度(du)範(fan)圍(wei)內(nei)，溫(wen)育(yu)所(suo)需(xu)時間與溫(wen)度(du)成(cheng)反(fan)比，即溫(wen)度(du)越(yue)高(gao)，則(ze)所(suo)需(xu)時(shi)間相(xiang)對(dui)較短。

　　溫(wen)育(yu)選擇(ze)：

　　溫(wen)育(yu)常采用的(de)溫(wen)度(du)有(you)43℃、37℃、室(shi)溫(wen)和4℃(冰(bing)箱(xiang)溫(wen)度(du))等。37℃是(shi)實驗室(shi)中(zhong)常用的(de)保(bao)溫(wen)溫(wen)度(du)，也(ye)是(shi)大多數抗(kang)原抗(kang)體(ti)結(jie)合(he)的(de)合(he)適(shi)溫(wen)度(du)。

　　在建立ELISA方(fang)法(fa)作反(fan)應動力(li)學研(yan)究時，兩(liang)次抗(kang)原抗(kang)體(ti)反(fan)應壹般(ban)在37℃經1-2小時，產物的(de)生(sheng)成(cheng)可達(da)。為加速反(fan)應，可提(ti)高(gao)反(fan)應(ying)的(de)溫(wen)度(du)，有(you)些(xie)試驗在43℃進行，但不(bu)宜采用更高(gao)的(de)溫(wen)度(du)。抗(kang)原抗(kang)體(ti)反(fan)應4℃更為，在放(fang)射(she)免疫(yi)測(ce)定(ding)中(zhong)多使(shi)反(fan)應(ying)在冰(bing)箱(xiang)中(zhong)過(guo)夜(ye)，以(yi)形(xing)成(cheng)最(zui)多(duo)的(de)沈澱(dian)。但因所需(xu)時間太(tai)長(chang)，在ELISA中(zhong)壹般(ban)不(bu)予采(cai)用(yong)。

　　溫(wen)育(yu)方(fang)式(shi)常采用溫(wen)箱(xiang)法(fa)、微波輻(fu)射法(fa)和水浴(yu)法(fa)。其(qi)中(zhong)水浴(yu)法(fa)能較好(hao)解(jie)決(jue)因受熱不(bu)均衡(heng)所(suo)致的(de)周(zhou)圍(wei)孔(kong)與中(zhong)央孔(kong)結(jie)果(guo)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)差(cha)異(yi)(“邊(bian)緣效(xiao)應"即(ji)外(wai)周(zhou)孔(kong)顯色較中(zhong)心(xin)孔(kong)深(shen))。可將(jiang)ELISA板(ban)置(zhi)於(yu)水浴(yu)箱(xiang)中(zhong)，板底(di)應(ying)貼(tie)著水面(mian)，使溫(wen)度(du)迅速平(ping)衡(heng)，為避免蒸發，板(ban)上應(ying)加蓋，也(ye)可用(yong)塑料貼(tie)封紙(zhi)或(huo)保(bao)鮮(xian)膜覆蓋板(ban)孔(kong)，此(ci)時可讓(rang)反(fan)應板(ban)漂浮(fu)在水面(mian)上。

　　若(ruo)用溫(wen)箱(xiang)，ELISA板應(ying)放(fang)在濕盒內(nei)，濕(shi)盒(he)要(yao)選用(yong)傳(chuan)熱性良好(hao)的(de)材料(如金屬(shu)等)，在盒底墊(dian)濕的(de)紗布(bu)，最後(hou)將ELISA板放(fang)在濕紗布(bu)上。濕(shi)盒應先(xian)放(fang)在保(bao)溫(wen)箱(xiang)中(zhong)預溫(wen)至(zhi)規(gui)定(ding)的(de)溫(wen)度(du)，特(te)別是在氣溫(wen)較低(di)的(de)時候(hou)更應如(ru)此(ci)。為避免酶標板底部(bu)受水汽或磨(mo)損導致的(de)讀(du)數(shu)誤差(cha)，壹(yi)般(ban)采用(yong)鼓風(feng)恒溫(wen)箱(xiang)保(bao)溫(wen)，這(zhe)個過(guo)程必(bi)須在酶標板上方(fang)貼(tie)封紙(zhi)，以(yi)免蒸發。

　　無(wu)論(lun)是(shi)水浴(yu)還(hai)是(shi)濕盒(he)溫(wen)育(yu)，反(fan)應(ying)板均不(bu)宜疊放(fang)，以(yi)保(bao)證(zheng)各(ge)板(ban)的(de)溫(wen)度(du)都(dou)能迅速平(ping)衡(heng)。室(shi)溫(wen)溫(wen)育(yu)的(de)反應(ying)，操(cao)作時(shi)的(de)室(shi)溫(wen)應(ying)嚴格限制(zhi)在規(gui)定(ding)的(de)範(fan)圍(wei)內(nei)，標準室(shi)溫(wen)溫(wen)度(du)是(shi)指20-25℃，但具(ju)體(ti)操(cao)作時(shi)可根(gen)據說(shuo)明(ming)書的(de)要求(qiu)控(kong)制(zhi)溫(wen)育(yu)。

　　室(shi)溫(wen)溫(wen)育(yu)時(shi)，ELISA板(ban)只要平(ping)置(zhi)於(yu)操作臺(tai)上即(ji)可。應(ying)註(zhu)意溫(wen)育(yu)的(de)溫(wen)度(du)和時(shi)間應(ying)按規(gui)定(ding)力(li)求(qiu)準確。為保(bao)證(zheng)時(shi)間(jian)精(jing)確，壹個人(ren)壹(yi)次不(bu)宜多於(yu)兩塊(kuai)板同時操作、測(ce)定(ding)。

　　關於(yu)溫(wen)育(yu)，實際(ji)測(ce)定(ding)操作中(zhong)應註(zhu)意哪些?

　　● 不(bu)同的(de)溫(wen)育(yu)環(huan)境(jing)對(dui)檢測(ce)結(jie)果(guo)有(you)影響，操作中(zhong)應嚴格按照(zhao)說明(ming)書控(kong)制(zhi)溫(wen)育(yu)時(shi)間(jian)及溫(wen)度(du)，並(bing)註(zhu)意封閉避免邊緣效(xiao)應(ying)。

　　● 為確保(bao)各(ge)板(ban)溫(wen)度(du)都(dou)能迅速達(da)到平(ping)衡(heng)，不(bu)可將(jiang)反(fan)應板(ban)疊加放(fang)置(zhi)，設定(ding)的(de)溫(wen)度(du)及(ji)時(shi)間嚴格按照(zhao)說明(ming)書進行，壹般(ban)加入(ru)待測(ce)樣本(ben)後使(shi)其(qi)與固(gu)相(xiang)抗(kang)原(抗(kang)體(ti))置(zhi)於(yu)37℃環(huan)境(jing)下溫(wen)育(yu)。因為很(hen)多(duo)恒溫(wen)箱(xiang)的(de)構造(zao)，溫(wen)度(du)及(ji)檢測(ce)的(de)溫(wen)度(du)並(bing)非(fei)酶標板溫(wen)育(yu)溫(wen)度(du)，所(suo)以(yi)使用恒溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育(yu)時(shi)建(jian)議將溫(wen)度(du)計(ji)置(zhi)於(yu)酶標板旁，保(bao)證(zheng)酶(mei)標板旁溫(wen)度(du)為37℃。

　　● 幹(gan)育和水溫(wen)的(de)影響差異(yi)較為明顯(xian)，建(jian)議使用(yong)水溫(wen)，註(zhu)意將(jiang)固(gu)相(xiang)板(ban)放(fang)入(ru)水中(zhong)，防止(zhi)受熱不(bu)均勻。

　　● 試劑(ji)盒壹般(ban)設定(ding)的(de)反應(ying)溫(wen)度(du)為 37℃，在這(zhe)個溫(wen)度(du)下放(fang)置(zhi) 30 分(fen)鐘，蒸(zheng)騰(teng)的(de)水分(fen)會(hui)許(xu)多(duo)，對(dui)於(yu)全部(bu)反應體(ti)系(xi)來(lai)講(jiang)，各(ge)種反應物(wu)的(de)濃度(du)會(hui)不(bu)斷(duan)增加(jia)，這(zhe)麽必(bi)會(hui)致使反(fan)應最終(zhong)的(de)OD值增(zeng)加，溫(wen)育(yu)時(shi)貼(tie)封片或(huo)加蓋，避免標本(ben)或稀釋液蒸(zheng)發。

　　● 試(shi)劑(ji)盒設定(ding)的(de)壹定(ding)溫(wen)度(du)下的(de)反應(ying)時(shi)間(jian)並不(bu)是反(fan)應(ying)的(de)終(zhong)點(dian)，提(ti)高(gao)反(fan)應(ying)的(de)溫(wen)度(du)，會(hui)加(jia)速反(fan)應，壹樣延(yan)長(chang)時間(jian)會(hui)影響反應，這(zhe)樣得(de)到(dao)的(de)反應(ying)程度(du)會(hui)比試劑(ji)盒斷(duan)定的(de)反應(ying)程度(du)深(shen)，也會(hui)引(yin)起(qi)陰性高(gao)值或(huo)假陽性。

　　實驗操(cao)作的(de)嚴謹性與實驗操(cao)作規(gui)範(fan)密不(bu)可分(fen)，未使(shi)用的(de)試劑(ji)應儲(chu)存(cun)於(yu)2-8℃，使用時應回(hui)溫(wen)到(dao)室(shi)溫(wen)(20-25℃)。切忌(ji)不(bu)同批(pi)次的(de)試劑(ji)混(hun)合(he)使(shi)用，要經常檢查(zha)酶標儀和微(wei)量移液器的(de)精度(du)和準備(bei)度…… ELISA看起(qi)來(lai)很(hen)簡單，但是(shi)在實際(ji)操作過(guo)程中(zhong)，絕不(bu)能掉(diao)以(yi)輕(qing)心(xin)，除(chu)了嚴謹規(gui)範(fan)的(de)實驗操(cao)作，高(gao)品(pin)質(zhi)的(de)試劑(ji)盒與專業(ye)的(de)技(ji)術團隊也是獲得(de)準確結(jie)果(guo)的(de)保(bao)證(zheng)!

　　ELISA試(shi)劑(ji)盒 本(ben)生(sheng)壹(yi)直(zhi)視(shi)質(zhi)量控(kong)制(zhi)為企(qi)業(ye)的(de)生(sheng)命(ming)，追(zhui)求(qiu)企(qi)業(ye)競爭(zheng)力(li)的(de)不(bu)斷(duan)提升。公司在經營(ying)中(zhong)始(shi)終(zhong)秉承(cheng)：遵紀(ji)守(shou)法(fa)，嚴於(yu)律己(ji)，寬仁(ren)以待，敢於(yu)承(cheng)擔的(de)企(qi)業(ye)精神作為標準，以(yi)過(guo)硬的(de)質(zhi)量和優(you)良的(de)服務來(lai)維護和拓(tuo)展(zhan)市場，較大限(xian)度(du)的(de)滿(man)足客(ke)戶(hu)的(de)需求(qiu)。與客戶(hu)的(de)共贏，是我們(men)的(de)發展(zhan)目標。本(ben)生(sheng)!您(nin)信(xin)任(ren)的(de)合(he)作夥(huo)伴(ban)。我(wo)們(men)願與您(nin)真誠合(he)作，共(gong)創美好(hao)的(de)未來(lai)。