豬遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)ELISA試劑(ji)盒(he)技術說明

　　檢(jian)測(ce)範(fan)圍：0.6μg/ml -22μg/ml

　　96T

　　使(shi)用(yong)目的： 豬遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)ELISA試劑(ji)盒(he)用(yong)於(yu)測(ce)定(ding)豬全(quan)血樣本中(zhong)遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)含量。

　　實驗原(yuan)理：本試(shi)劑(ji)盒(he)應(ying)用(yong)雙抗(kang)體夾心(xin)法(fa)測(ce)定(ding)標本中(zhong)豬遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)水平。用(yong)純化(hua)的豬遊(you)離(li)血 紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)抗(kang)體包被(bei)微(wei)孔板，制(zhi)成固(gu)相(xiang)抗(kang)體，往包(bao)被單(dan)抗(kang)的微(wei)孔中(zhong)依(yi)次加入遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai) (F-Hb)，再與(yu) HRP 標記的遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)抗(kang)體結合(he)，形(xing)成抗(kang)體-抗(kang)原(yuan)-酶標抗(kang)體復合(he)物(wu)， 經(jing)過(guo)*洗滌(di)後(hou)加(jia)底物(wu) TMB 顯(xian)色(se)。TMB 在(zai) HRP 酶(mei)的催(cui)化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色(se)，並(bing)在(zai)酸(suan)的作用(yong)下 轉(zhuan)化(hua)成最(zui)終的黃色(se)。顏(yan)色(se)的深淺和(he)樣品中(zhong)的遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)呈正(zheng)相(xiang)關。用(yong)酶標儀在(zai) 450nm 波(bo)長下(xia)測(ce)定(ding)吸光度(OD 值)，通(tong)過(guo)標準(zhun)曲線計(ji)算(suan)樣品中(zhong)豬遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)濃度。

　　標本要(yao)求(qiu)

　　1.標本采集(ji)後(hou)盡早(zao)進(jin)行提取(qu)，提取(qu)按(an)相(xiang)關文獻(xian)進(jin)行，提取(qu)後(hou)應(ying)盡快進(jin)行實驗。若(ruo)不(bu)能(neng)馬(ma)上(shang)進(jin)行試(shi)驗，可將(jiang)標本放(fang)於(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)

　　2.不(bu)能(neng)檢(jian)測(ce)含(han) NaN3 的樣品，因(yin) NaN3 抑制(zhi)辣根過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(HRP)活性(xing)。

　　操作步驟(zhou)

1. 標準(zhun)品的稀(xi)釋：本試(shi)劑(ji)盒(he)提供(gong)原(yuan)倍(bei)標準(zhun)品壹(yi)支(zhi)，用(yong)戶可按(an)照下(xia)列(lie)圖(tu)表(biao)在(zai)小(xiao)試(shi)管中(zhong)進(jin)行稀(xi)釋。

   

　　2. 加(jia)樣：分(fen)別(bie)設(she)空白(bai)孔(kong)(空白(bai)對(dui)照(zhao)孔不(bu)加(jia)樣品及酶標試劑(ji)，其(qi)余各(ge)步操作相(xiang)同)、標準(zhun)孔、待測(ce)樣品孔。在(zai)酶(mei)標包被(bei)板上(shang)標準(zhun)品準(zhun)確(que)加(jia)樣 50μl，待測(ce)樣品孔中(zhong)先(xian)加(jia)樣品稀(xi)釋液 40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加待(dai)測(ce)樣品 10μl(樣品最(zui)終稀(xi)釋度為 5 倍(bei))。加(jia)樣將樣品加於(yu)酶標板孔(kong)底(di)部，盡量不(bu)觸(chu)及孔壁，輕輕晃動混勻(yun)。

　　3. 溫育(yu)：用(yong)封板膜(mo)封板後(hou)置 37℃溫育(yu) 30 分(fen)鐘(zhong)。

　　4. 配(pei)液：將 30 倍(bei)濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾(liu)水 30 倍(bei)稀(xi)釋後(hou)備(bei)用(yong)

　　5. 洗滌(di)：小(xiao)心揭(jie)掉(diao)封板膜(mo)，棄去(qu)液體，甩幹(gan)，每孔(kong)加滿洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置 30 秒後(hou)棄去(qu)，如(ru)此重(zhong)復 5 次，拍幹(gan)。

　　6. 加酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶標試劑(ji) 50μl，空白(bai)孔(kong)除(chu)外。

　　7. 溫育(yu)：操作同 3。

　　8. 洗滌(di)：操作同 5。

　　9. 顯(xian)色(se)：每孔(kong)先加(jia)入顯(xian)色(se)劑 A50μl，再(zai)加入顯(xian)色(se)劑 B50μl，輕(qing)輕震(zhen)蕩混勻(yun)，37℃避光(guang)顯(xian)色(se) 10 分(fen)鐘(zhong).

　　10. 終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye) 50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)(此(ci)時(shi)藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色(se))。

　　11. 測(ce)定(ding)：以(yi)空白(bai)孔(kong)調(tiao)零，450nm 波(bo)長依(yi)序(xu)測(ce)量各(ge)孔的吸光度(OD 值)。 測(ce)定(ding)應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou) 15 分(fen)鐘(zhong)以(yi)內(nei)進(jin)行。

　　豬遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)操作程(cheng)序(xu)總結：

　　計(ji)算(suan)

　　以(yi)標準(zhun)物(wu)的濃度為橫坐(zuo)標，OD 值為縱坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙上(shang)繪出標準(zhun)曲線，根據樣品的 OD 值由(you)標準(zhun)曲線查出相(xiang)應(ying)的濃度;再乘以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu);或(huo)用(yong)標準(zhun)物(wu)的濃度與 OD 值(zhi)計(ji)算(suan)出標準(zhun)曲線的直線回(hui)歸(gui)方程(cheng)式(shi)，將樣品的 OD 值代入方程(cheng)式(shi)，計(ji)算(suan)出樣品濃度，再乘以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)，即(ji)為樣品的實際濃(nong)度。

　　註意事項

　　1.試劑盒(he)從(cong)冷(leng)藏環(huan)境(jing)中(zhong)取(qu)出應(ying)在(zai)室(shi)溫平衡 15-30 分(fen)鐘(zhong)後(hou)方可使(shi)用(yong)，酶標包被(bei)板開(kai)封後(hou)如(ru)未用(yong)完，板條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入密封袋中(zhong)保(bao)存(cun)。

　　2.濃洗滌(di)液(ye)可能(neng)會(hui)有(you)結晶(jing)析出，稀(xi)釋時可在(zai)水浴中(zhong)加(jia)溫助溶，洗滌(di)時(shi)不(bu)影(ying)響(xiang)結果。

　　3.各(ge)步加(jia)樣均(jun)應(ying)使(shi)用(yong)加樣器，並(bing)經(jing)常校對其(qi)準(zhun)確(que)性(xing)，以(yi)避免(mian)試(shi)驗(yan)誤(wu)差。壹(yi)次加樣時間(jian)最(zui)好(hao)控(kong)制(zhi)在(zai) 5 分(fen)鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標本數(shu)量多，推(tui)薦使(shi)用(yong)排槍(qiang)加樣。

　　4. 請(qing)每(mei)次測(ce)定(ding)的同時做(zuo)標準(zhun)曲線，最(zui)好(hao)做(zuo)復孔(kong)。如(ru)標本中(zhong)待(dai)測(ce)物(wu)質含(han)量過(guo)高(樣本 OD 值(zhi) 大(da)於(yu)標準(zhun)品孔第壹(yi)孔(kong)的 OD 值)，請(qing)先(xian)用(yong)樣品稀(xi)釋液稀(xi)釋壹(yi)定(ding)倍(bei)數(shu)(n 倍(bei))後(hou)再(zai)測(ce)定(ding)，計(ji)算(suan)時請(qing)最(zui)後(hou)乘以(yi)總稀(xi)釋倍(bei)數(shu)(×n×5)。 5. 封板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次性(xing)使(shi)用(yong)，以(yi)避免(mian)交(jiao)叉汙染(ran)。

　　6.底物(wu)請(qing)避光(guang)保(bao)存(cun)。

　　7.嚴(yan)格(ge)按(an)照說明書的操作進(jin)行，試(shi)驗結果判定(ding)必須(xu)以(yi)酶(mei)標儀讀數(shu)為準(zhun).

　　8.所有(you)樣品，洗滌(di)液(ye)和(he)各(ge)種廢棄物(wu)都(dou)應(ying)按(an)傳染(ran)物(wu)處(chu)理(li)。

　　9.本試(shi)劑(ji)不(bu)同批(pi)號(hao)組(zu)分(fen)不(bu)得(de)混用(yong)。

　　保(bao)存(cun)條件(jian)及有(you)效(xiao)期(qi)

　　1.試劑(ji)盒(he)保(bao)存(cun)：;2-8℃。

　　2.有(you)效(xiao)期(qi)：6 個月

　　豬遊(you)離(li)血紅蛋(dan)白(bai)(F-Hb)ELISA試劑(ji)盒(he)本生壹(yi)直(zhi)視質量控(kong)制(zhi)為企(qi)業(ye)的生命，追(zhui)求(qiu)企(qi)業(ye)競(jing)爭力(li)的不(bu)斷提升(sheng)。公司(si)在(zai)經(jing)營(ying)中(zhong)始(shi)終(zhong)秉(bing)承(cheng)：遵(zun)紀(ji)守法(fa)，嚴(yan)於(yu)律己，寬仁以(yi)待(dai)，敢於(yu)承(cheng)擔的企(qi)業(ye)精(jing)神作為標準(zhun)，以(yi)過(guo)硬的質量和(he)優(you)良的服務(wu)來(lai)維(wei)護(hu)和(he)拓(tuo)展市場(chang)，較(jiao)大(da)限(xian)度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是(shi)我們(men)的發展目標。本生!您信任的合作夥伴(ban)。我(wo)們(men)願與您(nin)真(zhen)誠(cheng)合(he)作，共創(chuang)美(mei)好(hao)的未來(lai)。