本生(sheng)快(kuai)訊(xun)——ELISA實(shi)驗中常遇到問(wen)題、產(chan)生(sheng)原(yuan)因(yin)及(ji)解(jie)決(jue)辦(ban)法

　　酶聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附(fu)實(shi)驗，簡(jian)稱為(wei) ELISA。ELISA 實(shi)驗是壹種非(fei)常(chang)經典的(de)免疫(yi)學(xue)實(shi)驗。雖然歷(li)史非常悠久了，但是還是不斷地在(zai)臨床(chuang)和基礎研究(jiu)中(zhong)得到應(ying)用。其主要(yao)用於：免(mian)疫(yi)酶(mei)染色(se)各種細(xi)胞內(nei)成(cheng)份的(de)定位(wei);研(yan)究(jiu)抗酶(mei)抗體(ti)的(de)合成(cheng);顯(xian)現微(wei)量的(de)免疫(yi)沈(chen)澱(dian)反(fan)應;定量(liang)檢測(ce)體(ti)液中抗(kang)原(yuan)或(huo)者抗(kang)體(ti)成(cheng)份。BUSNEN本(ben)生(sheng)小(xiao)編總結(jie)了壹些(xie)經驗問題。

　　問(wen)題 1：陽(yang)性與陰(yin)性不能達到 2.1 的(de)比值，陰(yin)性顏色(se)太(tai)深(shen)。

　　可能的(de)原(yuan)因(yin)：陰(yin)性對照(也就(jiu)是陽性對照的(de)除目標(biao)抗原(yuan)外的(de)其它成(cheng)分(fen))中有某種成(cheng)分(fen)與壹抗作(zuo)用。

　　解決(jue)的(de)方法：純化抗原(yuan)除(chu)去幹(gan)擾(rao)成(cheng)分(fen)。

　　問題 2：陽(yang)性與陰(yin)性不能達到 2.1 的(de)比值，陽性顏色(se)太(tai)淺(qian)。

　　可能的(de)原(yuan)因(yin)有 3 個(ge)：

　　1)壹抗效(xiao)價(jia)不好。 2)抗(kang)原(yuan)太(tai)稀(xi)。 3)封閉時(shi)間(jian)過長(chang)。

　　解(jie)決(jue)的(de)方法： 1)換用壹抗或(huo)增加壹抗用量。 2)增加抗(kang)原(yuan)濃度。 3)縮(suo)短封閉時(shi)間(jian)，封閉時(shi)間(jian)壹般 37 攝氏(shi)度 3 個(ge)小時(shi)，或(huo)者 4 攝氏(shi)度過(guo)夜。不能比(bi)這(zhe)個(ge)更長(chang)了。

　　問題 3：增加抗(kang)原(yuan)濃度，壹抗濃度不變(bian)，顯(xian)色(se)反(fan)應沒(mei)有表(biao)現出(chu)應(ying)有的(de)梯度。

　　可(ke)能的(de)問題： 壹抗與抗(kang)原(yuan)的(de)比例已(yi)經(jing)飽和。

　　解決的(de)方法： 增加壹抗用量; 或(huo)在(zai)壹抗用量不變(bian)的(de)情況下減(jian)少(shao)抗(kang)原(yuan)濃度做(zuo)梯度。

　　問(wen)題 4：增加壹抗濃度，顯(xian)色(se)反(fan)應沒(mei)有表(biao)現出(chu)應(ying)有的(de)梯度。

　　可(ke)能的(de)原(yuan)因(yin)：壹抗與抗(kang)原(yuan)的(de)比例已(yi)經(jing)飽和。

　　解決的(de)方法：增加抗(kang)原(yuan)用量;或(huo)在(zai)抗原(yuan)用量不變(bian)的(de)情況下減(jian)少(shao)壹抗濃度做(zuo)梯度。

　　問(wen)題 5：加完(wan) TMB 顯(xian)色(se)後(hou)顏色(se)梯度很(hen)明(ming)顯(xian)，但加了硫酸終(zhong)止(zhi)反(fan)應後顏色(se)梯度沒(mei)有那麽(me)明(ming)顯(xian)了。

　　可(ke)能的(de)原(yuan)因(yin)：硫酸可能把(ba)其它成(cheng)分(fen)都炭化了。

　　解(jie)決的(de)辦法：加少(shao)壹點(dian)硫酸，參考(kao)值：50 μlTMB+35 μl 硫酸;或者采(cai)用 1M 的(de) HCL 作(zuo)為(wei)終(zhong)止(zhi)液，50ulTMB+50ul1M HCL。

　　這(zhe)些(xie)步(bu)驟裏(li)面(mian)，壹抗和封閉是兩個(ge)關鍵(jian)。如果(guo) ELISA 做(zuo)不出滿(man)意的(de)結(jie)果(guo)，首先(xian)應該(gai)從(cong)這(zhe)兩個(ge)方面(mian)改進(jin)。Elisa 實(shi)驗看似簡(jian)單，其實(shi)不然。別(bie)小(xiao)瞧(qiao)了ELISA。光(guang)是壹個(ge)加樣(yang)就(jiu)有很(hen)多講究(jiu)。

　　ELISA 中(zhong)加樣(yang)須註(zhu)意如下問題：

　　吸(xi)取樣(yang)品時(shi)，加樣(yang)槍吸(xi)頭(tou)不應黏(nian)附(fu)多余(yu)的(de)液體(ti);加樣(yang)時(shi)不可 90 度向(xiang)孔中(zhong)滴加液體(ti)，這(zhe)樣會(hui)導致液體(ti)殘(can)留(liu)在(zai)吸(xi)頭(tou)上(shang)，加樣(yang)不準確! 不要將(jiang)吸(xi)頭(tou)伸(shen)入孔中(zhong)，壹方面(mian)若接(jie)觸(chu)孔底可(ke)能壓(ya)彎(wan)吸(xi)頭(tou)，另(ling)壹方面(mian)可能會(hui)將(jiang)孔中(zhong)的(de)液體(ti)吹(chui)起(qi)來(lai)，加樣(yang)不準確! 正(zheng)確(que)的(de)加樣(yang)方(fang)法應為(wei) 45 度，吸(xi)頭(tou)貼(tie)著(zhe)孔壁(bi)加入(ru)，應(ying)註意： 角(jiao)度太(tai)小(xiao)，會使液體(ti)殘(can)留(liu)在(zai)孔壁(bi)上(shang)，導(dao)致加樣(yang)不準確! 吸(xi)頭(tou)應(ying)當(dang)貼(tie)著(zhe)管壁(bi)和液面(mian)的(de)交(jiao)界處!

　　綜上(shang)所述(shu)，Elisa 實(shi)驗看似簡(jian)單，其實(shi)還(hai)是有很(hen)多細(xi)節需要我(wo)們註(zhu)意的(de)。以上(shang)介(jie)紹了 Elisa 實(shi)驗的(de)壹些(xie)經驗教(jiao)訓，希(xi)望(wang)對大(da)家有所幫助。

　　ELISA實(shi)驗 本生(sheng)壹直視(shi)質(zhi)量(liang)控(kong)制為(wei)企(qi)業的(de)生(sheng)命，追求企(qi)業競(jing)爭(zheng)力(li)的(de)不斷提(ti)升(sheng)。公司(si)在(zai)經營(ying)中始(shi)終(zhong)秉承(cheng)：遵(zun)紀(ji)守(shou)法，嚴(yan)於律(lv)己，寬仁以待(dai)，敢(gan)於承擔的(de)企業精(jing)神作(zuo)為(wei)標(biao)準，以過硬(ying)的(de)質(zhi)量(liang)和優(you)良(liang)的(de)服(fu)務來維護和拓展(zhan)市(shi)場，較(jiao)大(da)限(xian)度的(de)滿足客(ke)戶的(de)需求。與客(ke)戶的(de)共贏，是我(wo)們的(de)發(fa)展(zhan)目(mu)標(biao)。本(ben)生(sheng)!您信任的(de)合作(zuo)夥伴。我(wo)們願(yuan)與您真誠合作(zuo)，共創(chuang)美(mei)好(hao)的(de)未(wei)來。