超濾(lv)離心管(guan)，備有(you)四種材(cai)質的超(chao)濾(lv)膜：聚醚碸(feng)、三醋酸纖(xian)維(wei)素、再生纖(xian)維(wei)素和Hydrosart，可根(gen)據(ju)不(bu)同要求(qiu)靈活(huo)選用(yong)。

　　使(shi)用(yong)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

　　(1)選(xuan)擇(ze)合(he)適的超濾(lv)管(guan)。通常應(ying)截(jie)留分(fen)子量(liang)不(bu)應(ying)大(da)於目(mu)的(de)蛋(dan)白(bai)分子量(liang)的(de)1/3，比(bi)如(ru)目(mu)的(de)蛋(dan)白(bai)分子量(liang)為(wei)35kDa，就(jiu)可(ke)以(yi)選(xuan)擇(ze)10kDa截(jie)留分子量(liang)的(de)超(chao)濾(lv)管(guan)。若(ruo)目(mu)的(de)蛋(dan)白(bai)分子量(liang)為(wei)10kD左(zuo)右(you)，則(ze)可(ke)以(yi)用(yong)截留分子量(liang)3kD的(de)超(chao)濾(lv)管(guan)。認真閱讀使(shi)用(yong)說(shuo)明書(shu)，註意(yi)超濾(lv)膜對各種化(hua)學物質的耐受程(cheng)度(du)有(you)所不(bu)同。

　　(2)新買(mai)來(lai)的(de)超(chao)濾(lv)是(shi)幹(gan)燥(zao)的(de)，使(shi)用(yong)前(qian)加入超(chao)純水(shui)，水(shui)量(liang)過膜，冰(bing)浴(yu)或冰(bing)箱裏預冷(leng)幾分鐘。然後(hou)將水(shui)倒(dao)出，即(ji)可(ke)加入蛋(dan)白(bai)液，加入的(de)多(duo)少(shao)，以(yi)不(bu)超(chao)過管(guan)頂的(de)白(bai)線(xian)為(wei)準(zhun)。操作(zuo)要輕(qing)，加入蛋(dan)白(bai)液前，超(chao)濾(lv)管(guan)需要插(cha)在冰(bing)上預冷(leng)。

　　(3)平衡。質量和重(zhong)心二者(zhe)都(dou)要達(da)到平(ping)衡。註意轉(zhuan)速和加速度(du)不(bu)可(ke)太(tai)快，否則(ze)直接損壞超(chao)濾(lv)膜。開始(shi)離心超濾(lv)(離心機(ji)預冷(leng)至4度(du))。不(bu)同離心機(ji)的(de)轉(zhuan)速 rpm換算(suan)成(cheng)g之後(hou)，有(you)所不(bu)同。離心機(ji)的(de)加速度(du)調(tiao)至檔，減(jian)小(xiao)對膜的(de)壓(ya)力(li)。註(zhu)意，壹(yi)定(ding)要等(deng)離心機(ji)達(da)到目(mu)的(de)轉(zhuan)速之後(hou)，方(fang)可(ke)離開離心機(ji)，否則(ze)離心機(ji)出問題(ti)時(shi)，無法(fa)第壹時(shi)間處(chu)理(li)。膜(mo)與(yu)轉(zhuan)軸(zhou)的(de)方(fang)向根(gen)據(ju)說(shuo)明書(shu)調(tiao)整(zheng)(角轉(zhuan)離心機(ji)的(de)情況是(shi)膜(mo)與(yu)軸(zhou)垂(chui)直)。在實際使(shi)用(yong)中，壹(yi)般轉(zhuan)速開的(de)比說(shuo)明書(shu)裏的(de)要低(di)，這樣(yang)可以(yi)延(yan)長(chang)離心管(guan)的使(shi)用(yong)壽(shou)命(ming)。

　　(4)當(dang)濃(nong)縮到(dao)剩下(xia)1ml時(shi)，取(qu)50ul緩(huan)沖(chong)溶液，加入10ul流穿，看有(you)沒變(bian)藍色(se)，以(yi)此(ci)判(pan)斷(duan)超(chao)濾(lv)管(guan)是(shi)否漏掉蛋(dan)白(bai)。如果管(guan)漏了(le)，將上(shang)層(ceng)和流穿重(zhong)新倒(dao)入新(xin)管(guan)中開始(shi)超濾(lv)。要精(jing)確判(pan)斷(duan)是(shi)否漏管(guan)，用5mgml的(de)BSA離心10min，再取(qu)流穿，跑(pao)蛋(dan)白(bai)膠或(huo)Bradford粗測，繼(ji)續(xu)加入剩(sheng)下(xia)的(de)蛋(dan)白(bai)液濃(nong)縮(在(zai)冰(bing)上操作(zuo)，防止蛋白(bai)受熱(re))，直到所有濃(nong)縮液都(dou)加完為(wei)止。離心過程(cheng)中註(zhu)意(yi)是(shi)否發生蛋(dan)白(bai)沈澱，導(dao)致(zhi)堵(du)管(guan)。若(ruo)發生沈(chen)澱，要確定沈(chen)澱的(de)具(ju)體原因，是(shi)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)過高還是(shi)Buffer不(bu)合(he)適(shi);前(qian)者可用(yong)多(duo)根(gen)超濾(lv)管(guan)同時超濾(lv)，降低濃(nong)度(du)的(de)辦(ban)法(fa)解決(jue)，後(hou)者(zhe)的方(fang)法(fa)是(shi)換(huan)不(bu)同的緩沖溶液，直到(dao)蛋(dan)白(bai)不(bu)發生沈(chen)澱為(wei)止。

　　(5)前面幾步(bu)用(yong)以(yi)濃(nong)縮蛋(dan)白(bai)，如果要換(huan)Buffer，在總蛋(dan)白(bai)液濃(nong)縮至(zhi)1ml左右(you)的(de)時(shi)候，輕(qing)輕(qing)加入新(xin)的(de)Buffer(經(jing)0.22um超濾(lv)膜超濾(lv))，再 濃(nong)縮至(zhi)1ml左右(you)，連(lian)續(xu)三(san)次，最後(hou)壹(yi)次的濃(nong)縮終體積根(gen)據(ju)需(xu)要的(de)蛋白(bai)濃(nong)度(du)而定(ding)，壹(yi)般不(bu)多(duo)於500ul，也(ye)有(you)濃(nong)縮至(zhi)200ul以(yi)內(nei)的情況。按(an)照每(mei)次至少(shao)10倍左右(you)的(de)體積濃(nong)縮算(suan)，三次達到(dao)1000倍以(yi)上(shang)，基本上可(ke)以(yi)達(da)到換buffer的目(mu)的(de)。

　　超(chao)濾(lv)離心管(guan) 本生壹(yi)直(zhi)視質量控(kong)制(zhi)為企(qi)業(ye)的(de)生命(ming)，追求(qiu)企業(ye)競(jing)爭(zheng)力(li)的(de)不(bu)斷(duan)提(ti)升(sheng)。公(gong)司(si)在經(jing)營中始(shi)終秉(bing)承：遵紀守(shou)法(fa)，嚴於律(lv)己，寬仁(ren)以(yi)待(dai)，敢於承擔(dan)的企業(ye)精(jing)神作(zuo)為標(biao)準(zhun)，以(yi)過硬的(de)質量和優(you)良(liang)的(de)服(fu)務來(lai)維(wei)護(hu)和拓展市(shi)場(chang)，較(jiao)大(da)限度(du)的(de)滿(man)足客(ke)戶的需求(qiu)。與客(ke)戶(hu)的(de)共贏，是(shi)我(wo)們(men)的發展目(mu)標(biao)。本(ben)生!您(nin)信(xin)任(ren)的合作(zuo)夥(huo)伴。我們(men)願與(yu)您真誠合作(zuo)，共創(chuang)美(mei)好(hao)的未(wei)來(lai)。