本生(sheng)帶您了解、小分(fen)子化(hua)合(he)物(wu)(熒光染(ran)料(liao))

　　熒(ying)光染(ran)料(liao)是(shi)指(zhi)吸收某壹波長(chang)的(de)光波後能(neng)發射出(chu)另壹波長(chang)大(da)於(yu)吸收光的(de)光波的物質(zhi)。由於(yu)靈敏(min)度高(gao)，操(cao)作方便(bian)，逐漸取(qu)代了(le)放(fang)射性(xing)同位(wei)素作為(wei)檢(jian)測標(biao)記(ji)，其廣(guang)泛應用(yong)於(yu)熒光免(mian)疫(yi)，細(xi)胞(bao)染(ran)色(se)等(deng)。熒(ying)光染(ran)料(liao)即(ji)可(ke)以單獨(du)使(shi)用(yong)，也可(ke)以組(zu)合(he)成復(fu)合(he)熒(ying)光染(ran)料(liao)使(shi)用(yong)，用(yong)於(yu)染色體分(fen)析(xi)、細(xi)胞(bao)周期(qi)、細胞雕亡(wang)等(deng)相(xiang)關研究(jiu)。另(ling)有很多(duo)核酸染料在(zai)多(duo)色(se)染色(se)系統(tong)中(zhong)是非(fei)常有用(yong)的復(fu)染劑，可(ke)作為(wei)背景對照(zhao)，標(biao)記(ji)細(xi)胞(bao)核使細胞內(nei)結構(gou)的空間(jian)關系(xi)壹目了(le)然。

　　常(chang)用(yong)核酸染料

　　DAPI是(shi)結合(he)富(fu)含(han)A-T堿(jian)基對DNA序列(lie)的熒(ying)光染(ran)料(liao)。DAPI是(shi)壹種能(neng)夠與(yu)DNA中(zhong)大(da)部分(fen)A，T堿(jian)基相互結合(he)的(de)熒光染(ran)料(liao)﹐常(chang)用(yong)於(yu)熒光顯微(wei)鏡觀測。因(yin)為(wei)DAPI可(ke)以透過(guo)完(wan)整(zheng)的(de)細(xi)胞膜(mo)﹐它可(ke)以用(yong)於(yu)活(huo)細胞(bao)和固(gu)定細(xi)胞(bao)的(de)染色。當(dang)DAPI與(yu)雙鏈DNA結合(he)時(shi)，最(zui)大(da)吸收波長(chang)為(wei)358nm，最(zui)大(da)發射波長(chang)為(wei)461nm。DAPI的發射光為(wei)藍色，且DAPI和綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白GFP或Texas Red染劑(紅(hong)色(se)熒光染(ran)劑(ji))的(de)發(fa)射波長(chang)僅(jin)有少(shao)部(bu)分(fen)重疊(die)，可(ke)以利用(yong)這項特性在(zai)單壹的(de)樣品(pin)上進行(xing)多(duo)重熒(ying)光染(ran)色(se)。

　　壹般(ban)的，用(yong)於(yu)細胞核染色時(shi)，推(tui)薦(jian)的(de)DAPI工(gong)作濃度為(wei)0.5-10μg/mL。

　　Hoechst 33342是壹種可(ke)以穿透細(xi)胞(bao)膜(mo)的藍色熒光染(ran)料(liao)，它(ta)在(zai)嵌(qian)入(ru)雙鏈 DNA後釋放(fang)強(qiang)烈(lie)的(de)藍(lan)色(se)熒光，對細胞(bao)的毒(du)性(xing)較(jiao)低(di)。Hoechst 33342染色常用(yong)於(yu)細胞雕亡(wang)檢(jian)測，染(ran)色後用(yong)熒光顯微(wei)鏡觀察(cha)或(huo)流式細胞(bao)儀檢(jian)測。Hoechst 33342也常(chang)用(yong)於(yu)普通(tong)的細胞(bao)核染色，或常(chang)規(gui)的(de)DNA染色(se)。Hoechst 33342的最(zui)大(da)激(ji)發(fa)波長(chang)為(wei)346nm，最(zui)大(da)發射波長(chang)為(wei)460nm;Hoechst 33342和雙鏈DNA結合(he)後(hou)，最(zui)大(da)激(ji)發(fa)波長(chang)為(wei)350nm，最(zui)大(da)發射波長(chang)為(wei)461nm。

　　細胞雕亡(wang)檢(jian)測

　　JC-1是(shi)壹種廣(guang)泛用(yong)於(yu)檢(jian)測線粒體膜(mo)電位(wei)△Ψm的理想熒光探(tan)針(zhen)。在(zai)線粒體膜(mo)電位(wei)較(jiao)高(gao)時(shi)，JC-1 聚集(ji)在(zai)線粒體的(de)基(ji)質(zhi)中(zhong)，形成聚合(he)物(wu)，可(ke)以產生(sheng)紅色(se)熒(ying)光;在(zai)線粒體膜(mo)電位(wei)較(jiao)低(di)時(shi);JC-1不(bu)能(neng)聚集(ji)在(zai)線粒體的(de)基(ji)質(zhi)中(zhong)，此(ci)時(shi)JC-1為(wei)單體，可(ke)以產生(sheng)綠(lv)色熒(ying)光。線粒體膜(mo)電位(wei)的下降(jiang)是細胞(bao)雕(diao)亡(wang)早(zao)期(qi)的壹個(ge)標(biao)誌(zhi)性(xing)事(shi)件(jian)。通(tong)過JC-1從紅色熒光到綠(lv)色熒(ying)光的(de)轉(zhuan)變可(ke)以很容易(yi)地(di)檢(jian)測到細胞膜(mo)電位(wei)的下降(jiang),同時(shi)也可(ke)以用(yong)JC-1從紅色熒光到綠(lv)色熒(ying)光的(de)轉(zhuan)變作為(wei)細胞雕亡(wang)早(zao)期(qi)的壹個(ge)檢(jian)測指(zhi)標(biao)。

　　活(huo)性氧(yang)檢(jian)測

　　DCFH-DA本身沒(mei)有熒光，可(ke)以自由(you)穿(chuan)過細(xi)胞(bao)膜(mo)，進入(ru)細(xi)胞(bao)內(nei)後，可(ke)以被(bei)細胞(bao)內(nei)的(de)酯酶水(shui)解生(sheng)成DCFH。而DCFH不能(neng)通(tong)透細(xi)胞(bao)膜(mo)，從而使探針(zhen)很容易(yi)被(bei)裝(zhuang)載到細胞內。細(xi)胞(bao)內的活(huo)性氧(yang)可(ke)以氧(yang)化無熒(ying)光的(de)DCFH生(sheng)成有熒光的(de)DCF。檢(jian)測DCF的(de)熒光就(jiu)可(ke)以知道(dao)細胞(bao)內活(huo)性氧(yang)的水(shui)平。

　　ROS熒(ying)光探(tan)針(zhen)-DHE

　　DHE是(shi)壹種可(ke)滲透細(xi)胞(bao)的(de)藍(lan)色(se)熒光探(tan)針(zhen)，是(shi)過(guo)氧(yang)化物(wu)指(zhi)示(shi)劑，可(ke)用(yong)於(yu)檢(jian)測細(xi)胞內superoxide radical anion，能(neng)有效地(di)檢(jian)測活(huo)性氧(yang)類。這(zhe)種染料可(ke)以自由(you)地(di)進入(ru)細(xi)胞(bao)中(zhong)，脫氫後成為(wei)Ethidium。DHE可(ke)以直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)活(huo)細胞(bao)的(de)標(biao)記(ji)。DHE被(bei)活(huo)細胞(bao)攝(she)入(ru)後(hou)，可(ke)以在(zai)細(xi)胞內的超氧(yang)化物(wu)陰離(li)子作用(yong)下脫氫，產生(sheng)Ethidium。Ethidium可(ke)以和RNA或DNA結合(he)產生(sheng)紅色(se)熒(ying)光。當(dang)細胞內(nei)的(de)超(chao)氧(yang)化物(wu)陰離(li)子水(shui)平較(jiao)高(gao)時(shi)，產生(sheng)的Ethidium較(jiao)多(duo)，紅(hong)色熒(ying)光就(jiu)較(jiao)強(qiang)，反之則較(jiao)弱(ruo)。DHE本身為(wei)藍色熒光，最(zui)大(da)激(ji)發(fa)波長(chang)為(wei)370nm，最(zui)大(da)發射波長(chang)為(wei)420nm，脫氫後和RNA或DNA結合(he)產生(sheng)紅色(se)熒(ying)光，最(zui)大(da)激(ji)發(fa)波長(chang)為(wei)300nm，最(zui)大(da)發射波長(chang)為(wei)610nm，實際(ji)觀察(cha)時(shi)也可(ke)以使用(yong)535nm作為(wei)激(ji)發(fa)波長(chang)。

　　壹般(ban)的，用(yong)於(yu)細胞內超氧(yang)化物(wu)陰離(li)子檢(jian)測時(shi)，DHE的(de)常(chang)用(yong)濃度為(wei)1-10μM。

　　鈣離(li)子濃度檢(jian)測

　　Fluo-3 AM是(shi)常用(yong)的檢(jian)測細(xi)胞內鈣離(li)子濃度的熒光探(tan)針(zhen)之(zhi)壹。它(ta)穿透細(xi)胞(bao)膜(mo)進入(ru)細(xi)胞(bao)後(hou)被(bei)細胞(bao)內(nei)的(de)酯酶剪切形成 Fluo-3，從而被(bei)滯留(liu)在(zai)細(xi)胞內，Fluo-3若以遊離(li)配體形式存(cun)在(zai)時(shi)幾(ji)乎(hu)是(shi)非(fei)熒光性(xing)的(de)，但(dan)是(shi)當(dang)它與(yu)細(xi)胞內鈣(gai)離(li)子結合(he)後(hou)可(ke)以產生(sheng)較(jiao)強(qiang)的熒光，最(zui)大(da)激(ji)發(fa)波長(chang)為(wei)506nm，最(zui)大(da)發射波長(chang)為(wei)526nm。實際(ji)檢(jian)測時(shi)推(tui)薦(jian)使(shi)用(yong)的激(ji)發(fa)波長(chang)為(wei)488nm左右(you)，發射波長(chang)為(wei)525-530nm。可(ke)以使用(yong)激(ji)光共(gong)聚焦(jiao)顯微(wei)鏡或(huo)流式細胞(bao)儀檢(jian)測細(xi)胞內鈣離(li)子濃度的變化。

　　其他染料

　　尼羅(luo)紅是壹種親脂性(xing)的(de)惡(e)嗪類(lei)熒(ying)光染(ran)料(liao)，與(yu)脂類(lei)物(wu)質(zhi)結合(he)並發(fa)出熒光，在(zai)激(ji)發(fa)波長(chang)530nm激(ji)發(fa)下，顯示(shi)強烈(lie)桔(ju)紅色熒光。常(chang)用(yong)於(yu)檢(jian)測細(xi)胞內脂滴(di)。

　　Calcein-AM是(shi)壹種可(ke)對活(huo)細胞(bao)進(jin)行(xing)熒光標(biao)記(ji)的(de)細(xi)胞(bao)染(ran)色(se)試(shi)劑，它(ta)穿(chuan)透細(xi)胞(bao)膜(mo)進入(ru)細(xi)胞(bao)後(hou)被(bei)細胞(bao)內(nei)的(de)酯酶剪切形成Calcein，從而被(bei)滯留(liu)在(zai)細(xi)胞內，發出強(qiang)綠(lv)色熒(ying)光。Calcein的(de)激(ji)發(fa)和發射波長(chang)分(fen)別(bie)為(wei)490nm和515nm。Calcein-AM和PI經常被(bei)結合(he)用(yong)來(lai)作為(wei)活(huo)細胞(bao)和死細胞(bao)的雙重染(ran)色(se)。

　　FITC是在(zai)熒(ying)光素(su)的(de)基(ji)礎上通(tong)過化學反(fan)應(ying)增加(jia)(異)硫(liu)氰(qing)酸基團得(de)到的，硫(liu)氰(qing)酸基團可(ke)以和生(sheng)物活(huo)性物(wu)質(zhi)例(li)如蛋(dan)白質(zhi)上的伯(bo)胺(an)基(ji)團(tuan)反(fan)應(ying)形成硫(liu)脲(niao)鍵(jian)，從而實現對生(sheng)物活(huo)性物(wu)質(zhi)的熒(ying)光標(biao)記(ji)。FITC能(neng)和各種抗體蛋(dan)白等(deng)物(wu)質(zhi)結合(he)，通(tong)過在(zai)熒(ying)光顯微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)或(huo)流式細胞(bao)儀分(fen)析(xi)可(ke)進行(xing)定性(xing)、定位(wei)或定量(liang)的檢(jian)測。

　　本生(sheng)壹直(zhi)視(shi)質(zhi)量(liang)控制為(wei)企(qi)業的生(sheng)命，追(zhui)求(qiu)企(qi)業競爭(zheng)力(li)的不(bu)斷(duan)提升(sheng)。公司(si)在(zai)經(jing)營(ying)中(zhong)始終(zhong)秉(bing)承：遵紀(ji)守法(fa)，嚴(yan)於(yu)律己，寬仁以待，敢於(yu)承擔(dan)的(de)企(qi)業精神(shen)作為(wei)標(biao)準(zhun)，以過硬(ying)的質(zhi)量(liang)和優良的(de)服務(wu)來(lai)維護(hu)和拓(tuo)展(zhan)市(shi)場，較(jiao)大(da)限(xian)度的滿足客戶的需求(qiu)。與(yu)客戶的共贏(ying)，是(shi)我們的(de)發(fa)展(zhan)目標(biao)。本生(sheng)!您信(xin)任(ren)的(de)合(he)作夥伴(ban)。我們願(yuan)與(yu)您(nin)真誠合(he)作，共創(chuang)美好(hao)的(de)未(wei)來(lai)。