本生闡述(shu)：Elisa試(shi)劑(ji)盒的溫(wen)育(yu)如(ru)何(he)進行(xing)？
 

　　Elisa試(shi)劑(ji)盒的操作因固相(xiang)載體的形(xing)成(cheng)不同而有所(suo)差異，良好(hao)的儀器(qi)和正(zheng)確(que)的操作是(shi)ELISA檢測結(jie)果(guo)準確可(ke)靠的必(bi)要(yao)條(tiao)件。國(guo)內醫學檢驗(yan)壹(yi)般均(jun)用(yong)板式(shi)點(dian)。

　　Elisa試(shi)劑(ji)盒的操作步驟(zhou)：

　　方法壹(yi)：用於檢測未(wei)知(zhi)抗(kang)原(yuan)的雙抗(kang)體夾(jia)心法(fa):

　　1. 包(bao)被(bei)：用(yong)0.05M  PH9.牰(牰)碳酸(suan)鹽(yan)包(bao)被(bei)緩沖(chong)液(ye)將(jiang)抗體稀(xi)釋至(zhi)蛋(dan)白(bai)質含(han)量(liang)為1～10μg/ml。在(zai)每個(ge)聚苯乙烯板(ban)的反應孔(kong)中(zhong)加0.1ml，4℃過夜(ye)。次日(ri)，棄(qi)去孔(kong)內溶液(ye)，用洗滌(di)緩沖(chong)液(ye)洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌(di)，下(xia)同)。

　　2. 加(jia)樣(yang)：加壹(yi)定稀(xi)釋的待(dai)檢樣(yang)品(pin)0.1ml於上述(shu)已包(bao)被(bei)之(zhi)反應孔(kong)中(zhong)，置37℃孵(fu)育(yu)1小(xiao)時。然(ran)後洗(xi)滌(di)。(同時做空(kong)白(bai)孔，陰性(xing)對照孔及陽(yang)性(xing)對照孔)。

　　3. 加酶標抗(kang)體：於各反應孔(kong)中(zhong)，加入新鮮稀(xi)釋的酶標抗(kang)體(經(jing)滴(di)定後的稀(xi)釋度(du))0.1ml。37℃孵(fu)育(yu)0.5～1小(xiao)時，洗滌(di)。

　　4. 加(jia)底物液(ye)顯色(se)：於各反應孔(kong)中(zhong)加入臨時配(pei)制(zhi)的TMB底物(wu)溶液(ye)0.1ml，37℃10～30分鐘。

　　5. 終止(zhi)反應：於各反應孔(kong)中(zhong)加入2M硫(liu)酸(suan)0.05ml。

　　6.  結(jie)果(guo)判定：可(ke)於白(bai)色背景上，直(zhi)接用肉(rou)眼(yan)觀察結(jie)果(guo)：小(xiao)鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒反應孔(kong)內顏色越(yue)深(shen)，陽性(xing)程(cheng)度(du)越(yue)強(qiang)，陰性(xing)反應為(wei)無色(se)或(huo)較(jiao)淺，依(yi)據所(suo)呈(cheng)顏色的深淺(qian)，以“+"、“-"號(hao)表(biao)示(shi)。也可(ke)測O·D值(zhi)：在(zai)ELISA檢測儀上(shang)，於450nm(若以ABTS顯色(se)，則410nm)處(chu)，以(yi)空白(bai)對照孔調零後測各孔(kong)O·D值(zhi)，若大於規定(ding)的陰性(xing)對照OD值(zhi)的2.1倍，即(ji)為(wei)陽性(xing)。

　　18、對結(jie)果(guo)有疑(yi)問(wen)的樣(yang)品(pin)要(yao)用(yong)其(qi)它(ta)方法進行(xing)確(que)證(zheng)。

　　方法二：用(yong)於檢測未(wei)知(zhi)抗(kang)體的間接法：

　　用包(bao)被(bei)緩沖(chong)液(ye)將(jiang)已知(zhi)抗(kang)原(yuan)稀(xi)釋至(zhi)1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜(ye)。次日(ri)洗滌(di)3次。加壹(yi)定稀(xi)釋的待(dai)檢樣(yang)品(pin)(未(wei)知(zhi)抗(kang)體)0.1ml於上述(shu)已包(bao)被(bei)之(zhi)反應孔(kong)中(zhong),置37℃孵(fu)育(yu)1小(xiao)時,洗滌(di)。(同時做空(kong)白(bai)、陰性(xing)及陽(yang)性(xing)孔(kong)對照)於反應孔(kong)中(zhong)，加入新鮮稀(xi)釋的酶標二抗(kang)體(抗(kang)抗(kang)體)0.1ml，37℃孵(fu)育(yu)30-60分鐘，洗(xi)滌(di),zui後(hou)壹(yi)遍用(yong)DDW洗滌(di)。其(qi)余(yu)步驟(zhou)同“雙(shuang)抗(kang)體夾(jia)心法(fa)"的4、5、6。

　　其(qi)中(zhong)還有壹(yi)個(ge)步驟(zhou)特(te)別需(xu)要(yao)註(zhu)意那(na)就(jiu)是(shi)洗(xi)滌(di)：

　　洗(xi)滌(di)在(zai)ELISA過程(cheng)中(zhong)雖不是(shi)壹(yi)個(ge)反應步驟(zhou)，但(dan)卻(que)也決(jue)定(ding)著(zhe)實(shi)驗(yan)的成敗(bai)。ELSIA就(jiu)是(shi)靠洗滌(di)來(lai)達(da)到分離(li)遊離的和結(jie)合(he)的酶標記(ji)物的目的。通過洗滌(di)以(yi)清(qing)除(chu)殘(can)留在(zai)板(ban)孔(kong)中(zhong)沒能與(yu)固(gu)相(xiang)抗(kang)原(yuan)或抗體結(jie)合(he)的物質，以及在(zai)反應過程(cheng)中(zhong)非特異性(xing)地(di)吸附於固相(xiang)載體的幹擾(rao)物質。聚苯乙烯等塑(su)料對蛋(dan)白(bai)質的吸附是(shi)普(pu)遍(bian)性(xing)的，而在(zai)洗(xi)滌(di)時又(you)應把這(zhe)種(zhong)非特異性(xing)吸附的幹擾(rao)物質洗滌(di)下(xia)來。

　　ELISA試(shi)劑(ji)盒本生壹(yi)直(zhi)視(shi)質量(liang)控制(zhi)為企業的生命(ming)，追求企業競(jing)爭力(li)的不斷提升。公(gong)司(si)在(zai)經(jing)營中(zhong)始終秉承：遵(zun)紀守法(fa)，嚴(yan)於律己(ji)，寬(kuan)仁(ren)以(yi)待(dai)，敢於承擔(dan)的企業精神(shen)作為(wei)標準，以過硬的質量(liang)和優(you)良的服(fu)務來(lai)維護(hu)和拓(tuo)展市(shi)場，較大限(xian)度(du)的滿足(zu)客(ke)戶的需求。與客(ke)戶的共(gong)贏，是(shi)我們的發(fa)展(zhan)目標。本生!您(nin)信(xin)任的合作(zuo)夥伴(ban)。我們願與您(nin)真(zhen)誠(cheng)合作(zuo)，共(gong)創美好的未(wei)來。