小(xiao)鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)酶聯(lian)免(mian)疫分(fen)析(xi)法(fa)怎(zen)樣(yang)計(ji)算(suan)

　　小鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)(INS)試劑(ji)盒(ELISA)使用說(shuo)明書

　　l 本(ben)試劑(ji)盒用於體外(wai)定量(liang)檢(jian)測(ce)血(xue)清(qing)、血(xue)漿、組織(zhi)、細胞上(shang)清(qing)及(ji)相(xiang)關(guan)液體樣(yang)本(ben)中小鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)(INS)的含(han)量(liang)。

　　l 有(you)效期(qi)：6個月(yue)

　　l 保存(cun)條件：2-8℃

　　l 本試劑(ji)盒僅供(gong)體外(wai)研(yan)究(jiu)使用，不(bu)用於臨床(chuang)診斷

　　小鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)酶聯(lian)免(mian)疫實驗原理(li)

　　試劑(ji)盒采用雙抗(kang)體壹(yi)步(bu)夾心法(fa)酶聯(lian)免(mian)疫吸(xi)附試驗(yan)(ELISA)。往(wang)預先(xian)包(bao)被(bei)小(xiao)鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)(INS)捕獲抗(kang)體的包(bao)被(bei)微孔(kong)中，依次(ci)加(jia)入標本、標準品、HRP標(biao)記(ji)的檢(jian)測(ce)抗(kang)體，經過(guo)溫育並(bing)洗(xi)滌。用底物(wu)TMB顯(xian)色，TMB在(zai)過氧化(hua)物酶的催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色(se)，並在(zai)酸的作(zuo)用下轉化(hua)成最(zui)終的黃(huang)色(se)。顏色的深淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中的小(xiao)鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)(INS)呈正相(xiang)關。用酶標儀在(zai)450nm 波(bo)長(chang)下測(ce)定吸(xi)光(guang)度(OD 值(zhi))，計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)濃(nong)度。

　　樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)及要求(qiu)

　　1. 血(xue)清(qing)：全(quan)血(xue)標本請(qing)於室溫放(fang)置2小(xiao)時(shi)或(huo)4℃過夜後(hou)於(yu)1000g離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於-20℃或-80℃保存(cun)，但應(ying)避免(mian)反復(fu)凍融(rong)。

　　2. 血(xue)漿：可用EDTA或肝素(su)作為(wei)抗(kang)凝劑(ji)，標(biao)本(ben)采集(ji)後(hou)30分(fen)鐘(zhong)內(nei)於2 - 8°C 1000g離(li)心20分(fen)鐘(zhong)，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但應(ying)避免(mian)反復(fu)凍融(rong)。

　　3. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除殘留(liu)血(xue)液(勻漿(jiang)中裂(lie)解(jie)的紅(hong)細(xi)胞會(hui)影(ying)響測(ce)量(liang)結果(guo))，稱(cheng)重後(hou)將(jiang)組織(zhi)剪(jian)碎。將剪(jian)碎的組(zu)織(zhi)與對應體積的PBS(壹(yi)般(ban)按1:9的重(zhong)量(liang)體積比(bi)，比(bi)如1g的組(zu)織(zhi)樣(yang)品(pin)對應9mL的PBS，具(ju)體體積可根據(ju)實驗需要適當調(tiao)整，並做(zuo)好記(ji)錄(lu)。推薦(jian)在(zai)PBS中加(jia)入蛋(dan)白酶抑(yi)制劑)加(jia)入玻璃(li)勻漿(jiang)器(qi)中，於冰(bing)上(shang)充分(fen)研(yan)磨。為(wei)了(le)進(jin)壹(yi)步(bu)裂(lie)解(jie)組織細胞(bao)，可以對勻漿液(ye)進行超(chao)聲(sheng)破(po)碎，或反復(fu)凍融(rong)。最(zui)後(hou)將(jiang)勻漿(jiang)液於(yu)5000×g離(li)心(xin)5~10分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)檢(jian)測(ce)。

　　4. 細(xi)胞(bao)培養物上(shang)清(qing)或(huo)其(qi)它(ta)生物標(biao)本：1000g離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於-20℃或-80℃保存(cun)，但應(ying)避免(mian)反復(fu)凍融(rong)。

　　註(zhu)：標(biao)本(ben)溶(rong)血(xue)會影響(xiang)最後(hou)檢(jian)測(ce)結果(guo)，因(yin)此(ci)溶(rong)血(xue)標本不(bu)宜進(jin)行(xing)此(ci)項(xiang)檢測(ce)。

　　標(biao)本(ben)處(chu)理(li)

　　1. 本公司(si)只(zhi)對試劑(ji)盒本身(shen)負責，不(bu)對因使用該試劑(ji)盒所造(zao)成(cheng)的樣(yang)本(ben)消(xiao)耗負責，請使(shi)用者使(shi)用前充分(fen)考慮到樣(yang)本(ben)的可能使(shi)用量(liang)，預(yu)留(liu)充(chong)足的樣(yang)本(ben)。

　　2. 實驗前(qian)應預(yu)測(ce)標(biao)本(ben)含(han)量(liang)，如果(guo)標(biao)本濃(nong)度過(guo)高(gao)，應對標本進(jin)行稀釋，使(shi)稀釋後(hou)的標(biao)本(ben)符合(he)試劑(ji)盒的檢(jian)測(ce)範圍，計(ji)算(suan)時(shi)再(zai)乘(cheng)以相應(ying)的稀釋倍(bei)數(shu)。標本(ben)使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。

　　3. 若(ruo)所檢(jian)樣(yang)本(ben)不(bu)包(bao)含(han)在(zai)說(shuo)明書所(suo)列(lie)樣(yang)本(ben)之(zhi)中，建(jian)議進行預(yu)實驗驗(yan)證其(qi)有(you)效性(xing)，並註(zhu)意留(liu)存(cun)樣(yang)本(ben)。

　　4. 使(shi)用化(hua)學裂(lie)解(jie)液制備的組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)或(huo)細胞(bao)提取(qu)液可能會(hui)由於某些化(hua)學物(wu)質(zhi)的引入導致ELISA實驗結果(guo)偏差(cha)。

　　5. 若(ruo)樣(yang)本(ben)為(wei)細胞培養上清(qing)，因(yin)該類(lei)樣(yang)本(ben)幹(gan)擾因素(su)較多(duo)，如：細(xi)胞(bao)狀態(tai)、細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)、采(cai)樣(yang)時(shi)間(jian)等，所(suo)以(yi)可能存(cun)在(zai)檢測(ce)不(bu)出的情(qing)況。

　　6. 某些天(tian)然(ran)蛋(dan)白或重(zhong)組蛋(dan)白，包(bao)括原核及(ji)真核(he)重(zhong)組蛋(dan)白，可能因(yin)為與本(ben)產(chan)品所使用的檢(jian)測(ce)抗(kang)體及捕獲抗(kang)體不(bu)匹(pi)配(pei)，而(er)不(bu)被檢測(ce)出。

　　7. 建(jian)議使用新(xin)鮮樣(yang)本(ben)，保存(cun)時(shi)間(jian)過長(chang)可能會(hui)存(cun)在(zai)蛋(dan)白降解或(huo)變性(xing)導致實驗結果(guo)偏差(cha)。

　　需要而(er)未(wei)提供的試劑(ji)和(he)器(qi)材(cai)

　　1. 酶標儀(450nm)

　　2. 高(gao)精度加(jia)樣(yang)器(qi)及槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3. 37℃恒溫箱(xiang)

　　4. 蒸餾水(shui)或去(qu)離子(zi)水(shui)

　　小鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)酶聯(lian)免(mian)疫試劑(ji)盒組成(cheng)

　　備註：

　　1. 標(biao)準(zhun)品(pin)濃度依(yi)次(ci)為(wei)：40、20、10、5、2.5、0 mIU/L

　　2. 經過(guo)大量(liang)正(zheng)常(chang)標(biao)本檢驗，標本(ben)的正(zheng)常(chang)濃度值(zhi)均(jun)在(zai)試劑(ji)盒提供的檢(jian)測(ce)範圍內(nei)，實驗過(guo)程中直(zhi)接(jie)取(qu)50μL樣(yang)本(ben)上(shang)樣(yang)即(ji)可。當有(you)部分(fen)樣(yang)本(ben)值(zhi)超(chao)過(guo)最(zui)大(da)標(biao)準(zhun)品濃度時(shi)，可用樣(yang)本(ben)稀釋液(ye)將(jiang)標本(ben)進行適當稀釋後(hou)再(zai)進(jin)行實驗。

　　註(zhu)意事(shi)項(xiang)

　　1. 嚴(yan)格按(an)照(zhao)規定的時(shi)間(jian)和(he)溫度進(jin)行溫育以(yi)保證準確(que)結果(guo)。所(suo)有(you)試劑(ji)都必(bi)須(xu)在(zai)使用前達到室溫20-25℃。使(shi)用後(hou)立即冷藏保存(cun)試劑(ji)。

　　2. 洗(xi)板(ban)不(bu)正確(que)可以導致不(bu)準確(que)的結果(guo)。在(zai)加(jia)入底物(wu)前(qian)確(que)保盡量(liang)吸(xi)幹(gan)孔(kong)內(nei)液體。溫育過(guo)程(cheng)中不(bu)要讓微孔(kong)幹燥掉(diao)。

　　3. 消(xiao)除板(ban)底殘留(liu)的液(ye)體和(he)手(shou)指(zhi)印(yin)，否則(ze)影(ying)響(xiang)OD值(zhi)。

　　4. 底物(wu)顯(xian)色液應呈無(wu)色或(huo)很淺(qian)的顏色，已經變藍的底物(wu)液(ye)不(bu)能使用。

　　5. 避免(mian)試劑(ji)和(he)標(biao)本(ben)的交(jiao)叉汙(wu)染以免(mian)造(zao)成(cheng)錯誤結果(guo)。

　　6. 在(zai)儲存(cun)和(he)溫育時(shi)避免(mian)強(qiang)光直(zhi)接(jie)照(zhao)射。

　　7. 平衡至室溫後(hou)再(zai)打(da)開密封(feng)袋以防(fang)水(shui)滴(di)凝(ning)聚(ju)在(zai)冷板(ban)條上(shang)。

　　8. 任(ren)何(he)反應試劑(ji)不(bu)能接(jie)觸(chu)漂白溶(rong)劑或漂白溶(rong)劑所散發的強(qiang)烈(lie)氣(qi)體。任何(he)漂白成分(fen)都(dou)會(hui)破(po)壞(huai)試劑(ji)盒中反應試劑(ji)的生物活(huo)性(xing)。

　　9. 不(bu)能使用過期(qi)產(chan)品。

　　10. 如果(guo)可能傳(chuan)播(bo)疾(ji)病，所有(you)的樣(yang)品(pin)都(dou)應管理(li)好，按(an)照(zhao)規定的程(cheng)序(xu)處(chu)理(li)樣(yang)品(pin)和(he)檢(jian)測(ce)裝置。

　　試劑(ji)準備

　　試劑(ji)盒從冷藏環境中取(qu)出應在(zai)室溫平衡後(hou)方(fang)可使用。

　　20×洗(xi)滌緩(huan)沖液(ye)的稀釋：蒸餾水(shui)按1：20稀釋，即(ji)1份(fen)20×洗(xi)滌緩(huan)沖液(ye)加(jia)19份(fen)蒸餾水(shui)。

　　操(cao)作(zuo)步(bu)驟

　　1. 從(cong)室溫平衡20min後(hou)的鋁(lv)箔(bo)袋中取(qu)出所需板(ban)條，剩余(yu)板(ban)條用自封袋(dai)密(mi)封放(fang)回4℃。

　　2. 設置標(biao)準(zhun)品孔(kong)和(he)樣(yang)本(ben)孔(kong)，標準品(pin)孔(kong)各(ge)加(jia)不(bu)同濃(nong)度的標(biao)準(zhun)品50μL;

　　3. 樣(yang)本(ben)孔(kong)中加(jia)入待測(ce)樣(yang)本(ben)50μL;空(kong)白孔(kong)不(bu)加(jia)。

　　4. 除空白孔(kong)外(wai)，標準(zhun)品(pin)孔(kong)和(he)樣(yang)本(ben)孔(kong)中每孔(kong)加(jia)入辣根過氧化(hua)物酶(HRP)標記(ji)的檢(jian)測(ce)抗(kang)體100μL，用封板(ban)膜封住反應孔(kong)，37℃水(shui)浴鍋或恒(heng)溫箱(xiang)溫育60min。

　　5. 棄(qi)去(qu)液體，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(350μL)，靜(jing)置1min，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌液，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍幹，如此(ci)重復(fu)洗(xi)板(ban)5次(ci)(也(ye)可用洗(xi)板(ban)機洗(xi)板(ban))。

　　6. 每孔(kong)加(jia)入底物(wu)A、B各(ge)50μL，37℃避光孵(fu)育15min。

　　7. 每(mei)孔(kong)加(jia)入終止(zhi)液(ye)50μL，15min內(nei)，在(zai)450nm波(bo)長(chang)處測(ce)定各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)。

　　實驗結果(guo)計(ji)算(suan)

　　以所測(ce)標(biao)準(zhun)品(pin)的OD值(zhi)為(wei)橫坐標，標(biao)準品的濃(nong)度值(zhi)為(wei)縱坐標，在(zai)坐標紙(zhi)上(shang)或用相關軟(ruan)件繪制(zhi)標準(zhun)曲線(xian)，並(bing)得到直(zhi)線(xian)回歸(gui)方程(cheng)，將(jiang)樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)代(dai)入方程，計(ji)算(suan)出樣(yang)品(pin)的濃(nong)度。

　　試劑(ji)盒性(xing)能

　　1. 檢(jian)測(ce)範圍：1.25 mIU/L – 40 mIU/L。

　　2. 靈(ling)敏度：檢(jian)測(ce)濃(nong)度小(xiao)於0.1 mIU/L。

　　3. 特異性(xing)：不(bu)與其(qi)它(ta)可溶(rong)性(xing)結構(gou)類(lei)似物(wu)交(jiao)叉反應。

　　4. 重復(fu)性(xing)：板(ban)內(nei)變異系數(shu)小於(yu)10% ，板(ban)間變異系數(shu)小於(yu)15% 。

　　說(shuo)明

　　1. 由於(yu)現有(you)條件及科(ke)學技(ji)術(shu)水(shui)平尚(shang)不(bu)能對所有(you)供貨(huo)商提供的所(suo)有(you)原料(liao)進(jin)行(xing)全(quan)面(mian)的鑒(jian)定與分(fen)析(xi)，本(ben)產(chan)品可能存(cun)在(zai)壹(yi)定的質(zhi)量(liang)技(ji)術(shu)風(feng)險。

　　2. 最終的實驗結果(guo)與試劑(ji)的有(you)效性(xing)、實驗者的相(xiang)關(guan)操(cao)作(zuo)以(yi)及當時(shi)的實驗環(huan)境密(mi)切(qie)相(xiang)關(guan)，請務(wu)必(bi)準(zhun)備(bei)充(chong)足的標(biao)本(ben)備份(fen)。

　　3. 不(bu)同批(pi)次(ci)的同壹(yi)產(chan)品可能會(hui)有(you)少許(xu)差(cha)別(bie)，如：檢(jian)測(ce)限(xian)、靈(ling)敏度以(yi)及顯(xian)色時(shi)間(jian)等，請(qing)依(yi)據(ju)試劑(ji)盒內(nei)說(shuo)明書進(jin)行(xing)實驗操(cao)作(zuo)，網站電(dian)子(zi)版說(shuo)明書僅作(zuo)參(can)考。

　　4. 只(zhi)有(you)全部使用本試劑(ji)盒配套試劑(ji)才能保證檢測(ce)效果，不(bu)能混用其他制造(zao)商的產(chan)品。只(zhi)有(you)嚴(yan)格遵(zun)守本(ben)試劑(ji)盒的實驗說(shuo)明才會(hui)得(de)到最(zui)佳(jia)的檢(jian)測(ce)結果(guo)。

　　問(wen)題(ti)解答(da)

　　若(ruo)實驗效果不(bu)好，請(qing)及時(shi)對顯(xian)色結果(guo)拍(pai)照(zhao)，保留(liu)所(suo)用板(ban)條及(ji)未(wei)使用試劑(ji)，並妥善(shan)保存(cun)，然後(hou)聯(lian)系我(wo)公司(si)技(ji)術(shu)支(zhi)持為(wei)您解(jie)決(jue)問(wen)題(ti)。同時(shi)您(nin)也(ye)可以參(can)考以下(xia)資料(liao)：

　　小(xiao)鼠(shu)胰(yi)島(dao)素(su)(INS)試劑(ji)盒 本生壹(yi)直(zhi)視(shi)質量(liang)控(kong)制(zhi)為(wei)企業的生命(ming)，追(zhui)求(qiu)企(qi)業競爭力的不(bu)斷提升。公司(si)在(zai)經營中始終秉(bing)承(cheng)：遵紀(ji)守法，嚴(yan)於律己，寬(kuan)仁以待(dai)，敢於承(cheng)擔的企(qi)業(ye)精神作(zuo)為(wei)標(biao)準(zhun)，以過硬(ying)的質(zhi)量(liang)和(he)優(you)良(liang)的服(fu)務(wu)來維護(hu)和(he)拓(tuo)展(zhan)市(shi)場，較大(da)限(xian)度的滿(man)足客戶的需求(qiu)。與客戶的共贏，是(shi)我(wo)們的發展目(mu)標(biao)。本生!您信(xin)任的合(he)作(zuo)夥(huo)伴。我(wo)們願(yuan)與您(nin)真誠合(he)作(zuo)，共創(chuang)美好的未(wei)來。