實驗分析(xi)—elisa知(zhi)識要點(dian)顯(xian)色(se)和(he)比(bi)色(se)分析(xi)

　　顯(xian)色(se)

　　顯色(se)是ELISA中的後壹(yi)步(bu)溫(wen)育(yu)反應，此時(shi)酶催(cui)化無色(se)的底(di)物生(sheng)成(cheng)有(you)色(se)的產(chan)物。反應的(de)溫(wen)度和(he)時(shi)間仍(reng)是影響(xiang)顯色(se)的因素。在(zai)壹(yi)定時(shi)間內，陰性孔可保持(chi)無色(se)，而陽性孔則(ze)隨(sui)時(shi)間的(de)延(yan)長而呈(cheng)色(se)加強(qiang)。適當(dang)提(ti)高溫度有(you)助(zhu)於(yu)加(jia)速顯(xian)色(se)進行(xing)。在(zai)定量(liang)測(ce)定中，加入底(di)物(wu)後的(de)反(fan)應溫(wen)度和(he)時(shi)間應按規(gui)定力(li)求準(zhun)確。定性測定的顯色(se)可在(zai)室(shi)溫進(jin)行(xing)，時(shi)間壹(yi)般不需要嚴格控制，有(you)時(shi)可根據(ju)陽性對(dui)照孔和(he)陰性(xing)對(dui)照孔的(de)顯(xian)色(se)適當(dang)縮短或(huo)延(yan)長反應時(shi)間，及(ji)時(shi)判斷(duan)。

　　OPD(鄰(lin)苯二胺(an))底(di)物顯色(se)壹般(ban)在(zai)室(shi)外溫(wen)或(huo)37℃反應20-30分鐘(zhong)後即(ji)不再加(jia)深(shen)，再延(yan)長反應時(shi)間，可使本(ben)底(di)值(zhi)增(zeng)高。OPD底物液(ye)受(shou)光(guang)照會自(zi)行(xing)變(bian)色(se)，顯色(se)反應應避(bi)光(guang)進(jin)行(xing)，顯(xian)色(se)反應結(jie)束(shu)時(shi)加入(ru)終止(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)反應。OPD產(chan)物(wu)用(yong)硫酸終止(zhi)後，顯(xian)色(se)由橙黃色(se)轉(zhuan)向棕(zong)黃(huang)色(se)。

　　TMB(四甲(jia)基聯(lian)苯胺)受(shou)光(guang)照的影(ying)響(xiang)不大，可在(zai)室(shi)溫中(zhong)置於(yu)操作臺上(shang)，邊(bian)反應觀察(cha)結果(guo)。elisa試(shi)劑(ji)盒(he)但(dan)為(wei)保證(zheng)實驗結果的穩(wen)定性，宜(yi)在(zai)規(gui)定的適當(dang)時(shi)間閱讀(du)結果。TMB經HRP作用(yong)後，約(yue)40分鐘(zhong)顯(xian)色(se)達，隨(sui)即(ji)逐(zhu)漸減(jian)弱，至2小(xiao)時(shi)後即(ji)可*消退(tui)至無色(se)。TMB的終(zhong)止(zhi)液(ye)有(you)多(duo)種(zhong)，疊氮鈉和(he)十(shi)二(er)烷基硫(liu)酸(suan)鈉(na)(SDS)等(deng)酶(mei)抑(yi)制劑(ji)均(jun)可使反(fan)應終(zhong)止(zhi)。這類終(zhong)止(zhi)劑尚(shang)能(neng)使藍(lan)色(se)維持較(jiao)長時(shi)間(12-24小(xiao)時(shi))不褪(tui)，是目視(shi)判(pan)斷(duan)的良(liang)好(hao)終止(zhi)劑。此外(wai)，各(ge)類酸(suan)性終(zhong)止(zhi)液(ye)則(ze)會使(shi)藍(lan)色(se)轉(zhuan)變成(cheng)黃(huang)色(se)，此時(shi)可用(yong)特(te)定的波(bo)長(450nm)測讀(du)吸(xi)光(guang)值(zhi)。

　　比(bi)色(se)

　　比(bi)色(se)前應先用(yong)潔(jie)凈(jing)的吸(xi)水紙(zhi)拭幹板底(di)附(fu)著的液(ye)體(ti)，然(ran)後將(jiang)板正(zheng)確放(fang)入(ru)酶標(biao)比(bi)色(se)儀的(de)比(bi)色(se)架(jia)中。以(yi)軟(ruan)板為(wei)載體的(de)試(shi)驗，需先將板置於(yu)標(biao)準(zhun)96孔的(de)座(zuo)架(jia)中，才(cai)可進行(xing)比(bi)色(se)。在(zai)加(jia)底物(wu)液(ye)顯(xian)色(se)前，先將軟(ruan)板邊(bian)緣(yuan)剪(jian)凈，這樣，此板就可*平妥坐入(ru)座(zuo)架(jia)中。

　　比(bi)色(se)時(shi)應先以蒸餾(liu)水校零(ling)點(dian)，測(ce)讀(du)底物孔(未(wei)經任何(he)反(fan)應僅(jin)加(jia)底(di)物(wu)液(ye)的(de)孔)和(he)空(kong)白(bai)孔(以(yi)生(sheng)理鹽水或(huo)稀(xi)釋液(ye)代(dai)替標本(ben)作全過(guo)程的孔)，以(yi)記錄本(ben)次試(shi)驗的試(shi)劑(ji)狀(zhuang)況(kuang)。其後可用(yong)空(kong)白(bai)孔以(yi)蒸餾(liu)水校零(ling)點(dian)，以(yi)上各(ge)孔的(de)吸(xi)光(guang)度需減(jian)去(qu)空(kong)白(bai)孔的(de)吸(xi)光(guang)度，然(ran)後進(jin)行(xing)計算(suan)。

　　比(bi)色(se)結果(guo)的表(biao)達以往通(tong)用(yong)光(guang)密(mi)度(oplical density，OD)，現按規(gui)定用(yong)吸(xi)光(guang)度(absorbence，A)，兩者(zhe)含(han)義相(xiang)同(tong)。通(tong)常的表(biao)示方法(fa)是，將吸(xi)收(shou)波(bo)長寫於(yu)A字(zi)母(mu)的(de)右(you)下角(jiao)，如OPD的吸(xi)收(shou)波(bo)長為(wei)492nm，表(biao)示方法(fa)為(wei)“A492nm"或(huo)“OD492nm"。

　　酶標比(bi)色(se)儀

　　酶(mei)標比(bi)色(se)儀簡(jian)稱酶標儀，通(tong)常指於(yu)測(ce)讀(du)ELISA結果吸(xi)光(guang)度的光(guang)度計。針(zhen)對(dui)固(gu)相(xiang)載體形式的不同(tong)，各(ge)有(you)特(te)制的(de)適(shi)用(yong)於(yu)板、珠(zhu)和(he)小(xiao)試(shi)管(guan)的(de)設(she)計。許多(duo)試(shi)劑(ji)公(gong)司(si)配套供應酶(mei)標(biao)儀(yi)。酶(mei)標儀的主(zhu)要性能(neng)指標(biao)有(you)：測讀(du)速度、讀(du)數的準(zhun)確性(xing)、重復性、度和(he)可測範(fan)圍(wei)、線性(xing)等(deng)等(deng)。優良的(de)酶標(biao)儀(yi)的讀(du)數壹般(ban)可到0.001，準(zhun)確性(xing)為(wei)±1%，重復性達0.5%。舉(ju)例說(shuo)，若某(mou)孔測(ce)得的(de)A值(zhi)為(wei)1.083，則(ze)該孔相(xiang)對(dui)於(yu)空(kong)氣(qi)的真(zhen)實A值(zhi)應為(wei)1.083± 0.01(1.073～1.093)，重復測定數次，其A值(zhi)均(jun)應1.083±0.05(1.078～1.088)在(zai)之(zhi)間(jian)。酶(mei)標(biao)儀的(de)可測範(fan)圍(wei)視(shi)各(ge)酶標儀的性(xing)能(neng)而不同(tong)。普通(tong)的酶標(biao)儀在(zai)0.000～2.000，新(xin)型(xing)號的(de)酶標(biao)儀上限拓(tuo)寬(kuan)達2.900，甚至更高。超(chao)出(chu)可測上(shang)限(xian)的(de)A值(zhi)常以(yi)“*"或(huo)“over"或(huo)其它符號表(biao)示。應註(zhu)意(yi)可測範(fan)圍(wei)與(yu)線(xian)性(xing)範圍(wei)的不同(tong)，線性範圍(wei)常小(xiao)於(yu)可測範(fan)圍(wei)，比(bi)如某(mou)壹酶標儀(yi)的可測範(fan)圍(wei)為(wei)0.000～2.900，而其(qi)線性範圍(wei)僅(jin)0.000～2.000，這(zhe)在(zai)定量(liang)ELISA中(zhong)制作(zuo)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)時(shi)應予(yu)註(zhu)意(yi)。

　　酶(mei)標儀(yi)不應安(an)置在(zai)陽光(guang)或(huo)強(qiang)光(guang)照射(she)下，操作時(shi)室溫(wen)宜(yi)在(zai)15-30℃，使(shi)用(yong)前先預(yu)熱儀器(qi)15-30分鐘(zhong)，測(ce)讀(du)結果更穩(wen)定。

　　測讀(du)A值(zhi)時(shi)，要選用(yong)產物的敏(min)感(gan)吸(xi)收(shou)峰，如OPD用(yong)492nm波(bo)長。有(you)的酶標(biao)儀可用(yong)雙(shuang)波(bo)長式測(ce)讀(du)，即(ji)每孔先後測(ce)讀(du)兩次，次在(zai)適(shi)波(bo)長(W1)，第(di)二(er)次在(zai)不敏感(gan)波(bo)長(W2)，兩次測定間不移動(dong)ELISA板的(de)位(wei)置。例(li)如OPD用(yong)492nm為(wei)W1，630nm為(wei)W2，終測(ce)得的(de)A值(zhi)為(wei)兩者(zhe)之(zhi)差(cha)(W1-W2)。雙(shuang)波(bo)長式測(ce)讀(du)可減少(shao)由容器(qi)上(shang)的(de)劃(hua)痕或(huo)指印(yin)等造(zao)成的(de)光(guang)幹(gan)擾。

　　各(ge)種酶標儀性(xing)能(neng)有(you)所不同(tong)，使用(yong)中應詳細閱讀(du)elisa試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書

　　elisa 本生(sheng)壹(yi)直視(shi)質(zhi)量(liang)控制為(wei)企(qi)業(ye)的生(sheng)命(ming)，追(zhui)求企(qi)業(ye)競(jing)爭(zheng)力(li)的不斷(duan)提(ti)升。公(gong)司(si)在(zai)經營中(zhong)始(shi)終秉承：遵(zun)紀守(shou)法(fa)，嚴於(yu)律己(ji)，寬(kuan)仁(ren)以待(dai)，敢(gan)於(yu)承(cheng)擔的企(qi)業(ye)精(jing)神作(zuo)為(wei)標準(zhun)，以過(guo)硬(ying)的(de)質(zhi)量(liang)和(he)優良(liang)的(de)服(fu)務來維護(hu)和(he)拓展市(shi)場(chang)，較(jiao)大限度的滿(man)足客(ke)戶(hu)的(de)需求。與(yu)客(ke)戶(hu)的(de)共贏，是我們的發(fa)展目(mu)標(biao)。本(ben)生(sheng)!您信(xin)任(ren)的合作夥(huo)伴(ban)。我(wo)們(men)願與(yu)您真(zhen)誠合作(zuo)，共創美(mei)好的(de)未來。