本生(sheng)—ELISA檢(jian)測的(de)原理及(ji)方法

　　酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附(fu)試(shi)驗(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)指(zhi)將可(ke)溶(rong)性的(de)抗(kang)原或抗(kang)體結合(he)到聚(ju)苯乙(yi)烯(xi)等固(gu)相(xiang)載(zai)體上(shang)，利用(yong)抗(kang)原抗體結合(he)專(zhuan)壹(yi)性(xing)進(jin)行(xing)免(mian)疫(yi)反應的(de)定(ding)性(xing)和定量(liang)檢(jian)測方法。它(ta)是應(ying)用(yong)最(zui)多(duo)的(de)壹(yi)種(zhong)免(mian)疫(yi)酶(mei)技(ji)術(shu)。ELISA試劑(ji)盒(he)(ELISAKits)已成(cheng)為藥(yao)物和植物病(bing)理(li)學研究中(zhong)的(de)常(chang)用(yong)診(zhen)斷工具，是檢(jian)測(ce)組織提取液(ye)、血(xue)清和細胞培(pei)養液(ye)中(zhong)目標(biao)抗體/抗原的(de)理(li)想工具，也(ye)是重要的(de)質量(liang)控(kong)制手(shou)段。

　　1.主(zhu)要實驗原理：

　　包(bao)被(bei)：抗(kang)原或者抗(kang)體能以物理(li)性(xing)吸附(fu)於(yu)固(gu)相載(zai)體表面，原因(yin)是蛋(dan)白(bai)質和聚(ju)苯乙(yi)烯(xi)表面間(jian)的(de)疏(shu)水性部(bu)分(fen)相互(hu)吸附(fu)，吸附(fu)之(zhi)後能(neng)保持(chi)抗原抗體反應等(deng)免(mian)疫(yi)活(huo)性(xing);

　　標(biao)記(ji)：抗原或者抗(kang)體可(ke)通(tong)過共(gong)價(jia)鍵與酶連(lian)接(jie)成酶(mei)結(jie)合(he)物，而(er)此(ci)種(zhong)酶結(jie)合(he)物仍(reng)能(neng)保(bao)持(chi)其免(mian)疫(yi)活(huo)性(xing)和酶的(de)催(cui)化(hua)特(te)點;

　　顯色(se)：酶結合(he)物與(yu)相(xiang)應包(bao)被(bei)在(zai)固(gu)相(xiang)載(zai)體的(de)抗(kang)原或者抗(kang)體結合(he)後，也(ye)被(bei)固(gu)定(ding)在(zai)固(gu)相(xiang)載(zai)體上(shang)，加入酶的(de)底(di)物之(zhi)後可(ke)出(chu)現(xian)顯色(se)反應，根據(ju)反應的(de)顏(yan)色(se)深淺可(ke)計(ji)算抗原或者抗(kang)體的(de)相(xiang)對(dui)含量(liang)。

　　2.ELISA檢(jian)測的(de)方(fang)法：

　　雙抗(kang)夾心法

　　雙抗(kang)夾心法常(chang)用(yong)於(yu)抗(kang)原、蛋白(bai)等(deng)檢測。因(yin)為靶標(biao)夾在包(bao)被(bei)在(zai)孔(kong)上(shang)的(de)捕(bu)獲抗體和檢測(ce)抗體之間(jian)，故稱(cheng)之(zhi)為雙抗(kang)夾心法。壹(yi)般分(fen)為：雙抗(kang)體夾心法和雙抗(kang)原夾心法，前(qian)者用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)抗原，後者用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)抗體。與間(jian)接(jie)法相(xiang)比(bi)，具有*的(de)靈(ling)敏度(du)和特(te)異(yi)性(xing)。主(zhu)要針對(dui)至(zhi)少2個(ge)抗原決定簇的(de)多(duo)價(jia)抗原。

　　臨床(chuang)上(shang)具有2個(ge)抗原決定簇的(de)多(duo)價(jia)抗原有很(hen)多(duo)，比較常見(jian)有HBsAg、AFP、HCG等(deng)大(da)分(fen)子抗(kang)原。檢測(ce)步(bu)驟(zhou)為：先將純化(hua)的(de)相(xiang)應(ying)抗(kang)體包(bao)被(bei)在(zai)固(gu)相(xiang)載(zai)體上(shang)，再加入待測(ce)樣品，若(ruo)其中(zhong)含有待(dai)測(ce)抗原就(jiu)會(hui)與固(gu)相(xiang)抗體結合(he)，洗(xi)掉(diao)雜質後，再(zai)加入酶標(biao)記的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體進行(xing)反應，洗(xi)掉多(duo)余的(de)酶(mei)標(biao)抗(kang)體後，加入底物顯色(se)，顯色(se)與否以及(ji)顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺(qian)就(jiu)代(dai)表了(le)待(dai)測抗(kang)原是否(fou)存(cun)在以及(ji)相對含量(liang)。

　　競(jing)爭法

　　競(jing)爭(zheng)法ELISA壹(yi)般用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)小分(fen)子抗(kang)原。小分(fen)子抗(kang)原或半(ban)抗原因(yin)缺乏(fa)可(ke)作(zuo)夾心法的(de)兩(liang)個(ge)以上(shang)的(de)位點，無法同時(shi)與(yu)兩(liang)種(zhong)抗體結合(he)因(yin)此(ci)不(bu)能用(yong)雙抗(kang)體夾心法進(jin)行(xing)測定(ding)，故可(ke)以采(cai)用(yong)競(jing)爭(zheng)法模(mo)式。壹(yi)般常用(yong)於(yu)小(xiao)分(fen)子、lgA、lgG、lgM等(deng)檢測(ce)。該技(ji)術(shu)測抗(kang)原的(de)原理是標(biao)本(ben)中(zhong)的(de)抗(kang)原和壹(yi)定(ding)量(liang)的(de)酶(mei)標(biao)抗(kang)原競爭(zheng)與(yu)固相抗(kang)體結合(he)。標(biao)本(ben)中(zhong)抗(kang)原量(liang)含量(liang)愈(yu)多，結(jie)合(he)在(zai)固(gu)相上(shang)的(de)酶(mei)標(biao)抗(kang)原愈(yu)少，最(zui)後的(de)顯色(se)也(ye)愈(yu)淺。

　　間(jian)接(jie)法

　　是檢(jian)測(ce)抗體酶聯免(mian)疫(yi)吸附(fu)試(shi)驗常(chang)用(yong)也(ye)簡(jian)單(dan)的(de)方(fang)法。其原理為利用(yong)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)抗(kang)體以檢測已與(yu)固(gu)相抗(kang)原結合(he)的(de)受(shou)檢(jian)抗(kang)體，故稱(cheng)為間(jian)接(jie)法。間(jian)接(jie)法具有壹(yi)些(xie)特(te)點：1.酶標記抗(kang)抗(kang)體可(ke)選(xuan)擇性(xing)檢測抗(kang)體的(de)亞(ya)型(xing)，可(ke)用(yong)於(yu)鑒別感(gan)染(ran)時(shi)期(qi);2.酶標(biao)抗抗體檢測抗體特(te)異(yi)性(xing)不(bu)高(gao)，容易產(chan)生(sheng)假(jia)陽性。臨床(chuang)上(shang)常用(yong)該(gai)方(fang)法檢(jian)測(ce)抗HCV抗體、抗HEV抗體、抗CMV抗體、抗HSV抗體、抗沙(sha)眼(yan)衣原體抗體等。

　　3.應用(yong)範(fan)圍(wei)：

　　ELISA檢(jian)測內(nei)容：

　　大分(fen)子(多(duo)肽等)、小(xiao)分(fen)子(農藥(yao)、抗(kang)生(sheng)素(su)、代謝(xie)產(chan)物等(deng))

　　動(dong)植物病(bing)害檢測

　　血清(qing)蛋白(bai)濃度(du)

　　醫(yi)療(liao)診斷

　　食品安全診斷

　　本生(sheng)ELISA檢(jian)測 本生(sheng)壹(yi)直視質量(liang)控(kong)制為企業(ye)的(de)生(sheng)命，追(zhui)求(qiu)企業(ye)競(jing)爭力(li)的(de)不(bu)斷提升。公(gong)司(si)在經(jing)營(ying)中(zhong)始(shi)終(zhong)秉承：遵(zun)紀(ji)守(shou)法，嚴(yan)於(yu)律己(ji)，寬仁以待，敢於承(cheng)擔(dan)的(de)企業(ye)精(jing)神作(zuo)為標準，以過硬的(de)質量(liang)和優良(liang)的(de)服(fu)務(wu)來(lai)維護(hu)和拓(tuo)展(zhan)市(shi)場，較大限(xian)度(du)的(de)滿(man)足(zu)客(ke)戶的(de)需(xu)求(qiu)。與(yu)客(ke)戶的(de)共(gong)贏，是我(wo)們(men)的(de)發(fa)展(zhan)目標(biao)。本生(sheng)!您信(xin)任(ren)的(de)合(he)作(zuo)夥伴(ban)。我(wo)們願(yuan)與(yu)您真(zhen)誠合(he)作(zuo)，共(gong)創(chuang)美好(hao)的(de)未來(lai)。