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妳(ni)知道NC膜(mo)和(he)PVDF膜(mo)該(gai)怎(zen)麽(me)選麽(me)?
1、硝酸纖維(wei)素膜
硝酸纖維(wei)素膜(NC膜(mo))是(shi)蛋白印(yin)跡實(shi)驗(yan)的標(biao)準(zhun)固(gu)相支持物。在(zai)低(di)離子(zi)轉(zhuan)移(yi)緩沖液(ye)的環境下,大多數帶負電荷的蛋白質(zhi)會(hui)與硝酸纖維(wei)素膜發(fa)生(sheng)疏水(shui)作(zuo)用而(er)高親(qin)和(he)力(li)的結(jie)合(he)在(zai)壹起(qi),雖(sui)然這其(qi)中的機(ji)制(zhi)還(hai)不是(shi)十分清楚,但(dan)由於硝酸纖維(wei)素膜(NC膜(mo))的這個特(te)性(xing),而且(qie)易(yi)於封(feng)閉(bi)非特(te)異(yi)性(xing)結合,從而(er)得(de)到(dao)了(le)廣(guang)泛(fan)的應用。
在(zai)非離子(zi)型的去汙(wu)劑(ji)作(zuo)用下(xia),結合的蛋白還(hai)可以被洗(xi)脫(tuo)下(xia)來。根據被(bei)轉移(yi)的蛋白分子量大小(xiao),要(yao)選擇不同(tong)孔(kong)徑的硝酸纖維(wei)素膜(NC膜(mo))。
因(yin)為隨著(zhe)膜孔(kong)徑的不(bu)斷(duan)減小,膜(mo)對(dui)低(di)分子(zi)量蛋白的結(jie)合(he)就(jiu)越牢固(gu)。但是(shi)膜孔(kong)徑如(ru)果(guo)小(xiao)於0.1mm,蛋白的轉(zhuan)移(yi)就(jiu)很難(nan)進行(xing)了。
從膜(mo)的質(zhi)地上來看,最(zui)重要(yao)的指(zhi)標(biao)就(jiu)是(shi)單位面(mian)積上(shang)能(neng)夠結(jie)合的蛋白的量。硝酸纖維(wei)素膜(NC膜(mo))的結(jie)合(he)能(neng)力(li)主要(yao)與膜(mo)的硝酸纖維(wei)素的純(chun)度有關,市場(chang)上有些(xie)硝酸纖維(wei)素膜(NC膜(mo))通(tong)常會(hui)還(hai)有大量的醋(cu)酸纖維(wei)素,因而(er)降(jiang)低(di)了蛋白的結(jie)合(he)量。如果(guo)采(cai)用(yong)的是(shi)*純(chun)度的硝酸纖維(wei)素, 保證(zheng)了(le)最(zui)大(da)的蛋白結合量,可達(da)80-150μg/cm2。
由於*的純(chun)度,因(yin)而(er)也大大減少了(le)非特(te)異(yi)性(xing)的結(jie)合(he),降(jiang)低(di)雜(za)交背(bei)景,無(wu)需(xu)高嚴(yan)謹(jin)度的洗(xi)脫(tuo)步(bu)驟(zhou)。其(qi)次,膜的強度和(he)韌性(xing)也是(shi)需(xu)要(yao)考慮(lv)的因(yin)素。常規(gui)的硝酸纖維(wei)素膜比(bi)較(jiao)脆(cui),漂(piao)洗(xi)壹(yi)兩(liang)次就(jiu)會(hui)破損,不(bu)能(neng)反(fan)復(fu)使用(yong)。
2、PVDF轉(zhuan)移(yi)膜(mo)
PVDF膜(mo)即聚偏二(er)氟乙xi膜(polyvinylidene fluoride)是(shi)蛋白質(zhi)印(yin)跡法中常(chang)用的壹(yi)種(zhong)固(gu)相支持物。PVDF本(ben)質(zhi)是(shi)壹種疏水(shui)性(xing)的聚合物(wu),在(zai)水(shui)溶(rong)液(ye)中不(bu)會(hui)浸(jin)濕,為了在(zai)水(shui)性(xing)緩沖液(ye)和(he)系統中使(shi)用(yong)PVDF膜,首先必須將(jiang)其(qi)浸泡在(zai)50%(v/v)或更高濃度的醇(chun)溶(rong)液(ye)中。
(PVDF膜(mo)在(zai)使用(yong)時(shi)需(xu)預處理(li),用甲醇(chun)處理(li)的目(mu)的是(shi)活化膜上的正(zheng)電基(ji)團,使(shi)其(qi)更容(rong)易(yi)與帶(dai)負(fu)電的蛋白結合。)甲醇(chun)、乙醇(chun)和(he)異(yi)丙(bing)醇(chun)都適合(he)浸(jin)泡這種膜。隨著(zhe)膜的外觀從不(bu)透(tou)明(ming)到(dao)半(ban)透(tou)明(ming),*浸濕(shi)是(shi)顯(xian)而(er)易(yi)見的。之後必須用(yong)水(shui)反(fan)復(fu)沖洗(xi)以去除(chu)醇(chun)類(lei),經(jing)預處理(li)的膜(mo)可(ke)以直(zhi)接放(fang)入轉印(yin)緩沖液(ye)中平衡(heng)。
壹(yi)旦膜被浸濕(shi),蛋白結合可(ke)通過蛋白與膜(mo)的接觸(chu)而(er)實(shi)現(xian)。由(you)於蛋白與膜(mo)的結(jie)合(he)貫穿整(zheng)個膜(mo)的厚(hou)度(深(shen)度),結(jie)合(he)能力(li)是(shi)由孔(kong)的內(nei)部(bu)表面積來決定(ding)的,隨著(zhe)膜孔(kong)徑的不(bu)斷(duan)減小,膜(mo)對(dui)低(di)分子(zi)量的蛋白結合就(jiu)越牢固(gu)。
0.2um PVDF膜內(nei)部表面積大(da)約(yue)是(shi)0.45um PVDF 膜的三倍(bei),使(shi)其(qi)吸(xi)附(fu)能(neng)力更高。PVDF膜(mo)是(shi)疏水(shui)性(xing)的,壹(yi)般大於20kD的蛋白就(jiu)可以用0.45μm的膜(mo),小(xiao)於20kD的蛋白就(jiu)要(yao)用0.2μm的膜(mo)。
NC膜(mo) PVDF膜(mo) 天津本(ben)生壹(yi)直(zhi)視(shi)質(zhi)量控(kong)制(zhi)為(wei)企(qi)業的生(sheng)命,追求企(qi)業競(jing)爭(zheng)力(li)的不(bu)斷(duan)提升(sheng)。公(gong)司(si)在(zai)經營(ying)中始(shi)終(zhong)秉承:遵(zun)紀(ji)守(shou)法,嚴(yan)於律己,寬仁(ren)以待(dai),敢於承擔的企(qi)業精(jing)神作(zuo)為標(biao)準(zhun),以過硬的質(zhi)量和(he)優(you)良(liang)的服(fu)務(wu)來維護和(he)拓(tuo)展市場(chang),較(jiao)大限(xian)度的滿(man)足客(ke)戶(hu)的需(xu)求。與客(ke)戶(hu)的共(gong)贏(ying),是(shi)我們的發(fa)展目(mu)標。本(ben)生!您(nin)信任(ren)的合(he)作(zuo)夥伴(ban)。我們願與您(nin)真(zhen)誠(cheng)合作(zuo),共創(chuang)美好的未(wei)來。
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