本(ben)試劑(ji)盒(he)只能用於科(ke)學研(yan)究，不(bu)得用(yong)於醫學診斷。
 
雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)使(shi)用(yong)說(shuo)明書(shu)

【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he) 試劑(ji)盒(he)名(ming)稱(cheng)】
雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)
【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he) 試劑(ji)盒(he)用(yong)途】
定(ding)量雞(ji)血清(qing)、血漿及(ji)相關液體樣(yang)本(ben)中凝血因(yin)子(zi)V(F5)的含量
【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)檢(jian)測原(yuan)理】
本(ben)試劑(ji)盒(he)采(cai)用(yong)雙抗(kang)體兩步夾(jia)心(xin)酶聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附法(fa)（ELISA）。將(jiang)標準品(pin)、待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)加入到(dao)預先(xian)包被凝血因(yin)子(zi)V(F5)透明酶(mei)標包被板(ban)中，溫(wen)育(yu)足夠時(shi)間後，洗滌(di)除去(qu)未結合(he)的成分(fen)，再(zai)加(jia)入(ru)酶標工作(zuo)液，溫(wen)育(yu)足夠時(shi)間後，洗滌(di)除去(qu)未結合(he)的成分(fen)。依次加入(ru)底物A、B，底(di)物（TMB）在辣根過氧(yang)化(hua)物酶（HRP）催(cui)化下(xia)轉(zhuan)化為(wei)藍色(se)產(chan)物，在酸的作(zuo)用下(xia)變成(cheng)黃色(se)，顏(yan)色(se)的深(shen)淺與樣(yang)品(pin)中凝血因(yin)子(zi)V(F5)濃(nong)度(du)呈正(zheng)相關，450nm波(bo)長下(xia)測(ce)定(ding)OD值(zhi)，根據標準品(pin)和(he)樣(yang)品(pin)的OD值，計(ji)算(suan)樣(yang)本(ben)中凝血因(yin)子(zi)V(F5)含(han)量。
【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he) 試劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)】

備(bei)註(zhu)：標準品(pin)用(yong)標準品(pin)稀(xi)釋液依次稀(xi)釋為：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml
 
【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)需要(yao)而未提(ti)供(gong)的試劑(ji)和(he)器(qi)材(cai)】
1、37℃恒(heng)溫(wen)箱(xiang)

2. 標準規(gui)格酶(mei)標儀

3. 精密移液器(qi)及(ji)壹次性(xing)吸頭(tou)

4. 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)

5. 壹次性(xing)試管(guan)

6. 吸(xi)水(shui)紙(zhi)

【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)】
1、準(zhun)備(bei)：從冰(bing)箱(xiang)取出(chu)試劑(ji)盒(he)，室(shi)溫(wen)復(fu)溫(wen)平衡30分(fen)鐘。
2、配(pei)液：用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)將(jiang)20倍(bei)濃(nong)縮洗滌(di)液稀(xi)釋成原(yuan)倍(bei)的洗滌(di)液。
3、加(jia)標準品(pin)和(he)待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)：取足夠數量的酶標包被板(ban)，固(gu)定(ding)於(yu)框架(jia)上(shang)，分(fen)別設置(zhi)標準品(pin)孔(kong)、待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)孔和空(kong)白(bai)對照(zhao)孔(kong)，記(ji)錄各(ge)孔位(wei)置(zhi)，在標準品(pin)孔(kong)中加入標準品(pin)50μL；待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)孔中先(xian)加入(ru)待(dai)測樣(yang)本(ben)10μL，再(zai)加(jia)樣(yang)本(ben)稀(xi)釋液40μL（即(ji)樣(yang)本(ben)稀(xi)釋5倍(bei)）；空(kong)白(bai)對照(zhao)孔(kong)不(bu)加。
4、溫(wen)育(yu)：37℃水(shui)浴(yu)鍋或恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育(yu)30min。
5、洗(xi)板(ban)：棄去(qu)液體，吸(xi)水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液，靜(jing)置(zhi)1min，甩去(qu)洗滌液，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹(gan)，如(ru)此重復(fu)洗板(ban)4次（也可用(yong)洗板(ban)機按(an)說(shuo)明書(shu)操(cao)作(zuo)洗板(ban)）。
6、加(jia)酶(mei)標工作(zuo)液：每孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標工作(zuo)液50μL，空(kong)白(bai)對照(zhao)孔(kong)不(bu)加。
7、溫(wen)育(yu)：重復(fu)4的操(cao)作(zuo)。
8、洗(xi)板(ban)：重復(fu)5的操(cao)作(zuo)。
9、顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)A 液50μL，再(zai)加(jia)入(ru)顯色(se)劑(ji)B液 50μL，37℃避光顯色(se)15min。
10、終止：取出(chu)酶(mei)標板(ban)，每孔(kong)加終止液50μL，終止反(fan)應（顏(yan)色(se)由(you)藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se)）。
11、測(ce)定(ding)：以(yi)空(kong)白(bai)孔(kong)調(tiao)零(ling)，在終止後15分鐘內，用450nm波(bo)長測(ce)量各(ge)孔的吸光值（OD值(zhi)）。
12、計(ji)算(suan)：根據標準品(pin)的濃度(du)及(ji)對應的OD值，計(ji)算(suan)出標準曲(qu)線(xian)的直(zhi)線(xian)回(hui)歸(gui)方程(cheng)，再(zai)根據樣(yang)本(ben)的OD值，在回(hui)歸(gui)方程(cheng)上(shang)計(ji)算(suan)出對應的樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)，也可以(yi)使(shi)用(yong)各(ge)種應用軟(ruan)件來(lai)計算(suan)。終濃度(du)為實際(ji)測定(ding)濃(nong)度(du)乘以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)。
【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he) 樣(yang)本(ben)要(yao)求(qiu)】
1、樣(yang)本(ben)不(bu)能(neng)含疊氮(dan)鈉（NaN₃），因(yin)為(wei)疊氮(dan)鈉（NaN₃）是(shi)辣(la)根過氧(yang)化(hua)物酶（HRP）的抑制(zhi)劑。
2、標本采(cai)集(ji)後盡早(zao)進行(xing)提(ti)取，提(ti)取按(an)相關文(wen)獻進行(xing)，提(ti)取後應盡快(kuai)進行(xing)實驗。若不能(neng)立(li)即(ji)試驗(yan)，可(ke)將(jiang)標本放(fang)於-20℃保(bao)存(cun)，但應避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。
3、樣(yang)本(ben)應充分離心(xin)，不得有(you)溶血及(ji)顆粒。
【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)註(zhu)意事項】
1、實驗嚴格按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)的操(cao)作(zuo)進行(xing)，實驗結果判定(ding)必(bi)須(xu)以酶(mei)標儀讀(du)數(shu)為(wei)準(zhun)。
2、酶(mei)標包被板(ban)開(kai)封後如(ru)未用(yong)完，應立(li)即(ji)裝(zhuang)入密封袋中加幹燥劑保(bao)存(cun)。
3、建(jian)議(yi)所(suo)有的標準品(pin)、樣(yang)本(ben)和空(kong)白(bai)對照(zhao)都(dou)做雙份檢(jian)測，取平均值(zhi)，以減小實驗誤差(cha)。
4、牢(lao)記(ji)樣(yang)本(ben)已經(jing)稀(xi)釋5倍(bei)，計(ji)算(suan)結果乘以(yi)5才(cai)是(shi)樣(yang)本(ben)實際(ji)濃度(du)。
5、本(ben)試劑(ji)盒(he)定(ding)量範(fan)圍為0.1-200ng/ml，超過此(ci)範(fan)圍，為標準曲(qu)線(xian)延(yan)伸(shen)計算(suan)所(suo)得，不(bu)做為準(zhun)確(que)定(ding)量結果，請用(yong)特(te)殊稀(xi)釋液稀(xi)釋後測定(ding)準(zhun)確(que)結果（0.1-200ng/ml範(fan)圍內），乘以總稀(xi)釋倍(bei)數(shu)即(ji)為(wei)樣(yang)本(ben)終濃度(du)。
6、若(ruo)顯(xian)色(se)過淺，可(ke)適(shi)當(dang)延(yan)長底(di)物溫(wen)育(yu)時(shi)間。
7、為(wei)避(bi)免交叉(cha)汙(wu)染(ran)，標準品(pin)、樣(yang)本(ben)和空(kong)白(bai)對照(zhao)每(mei)加(jia)壹個就(jiu)要(yao)更(geng)換壹次吸頭(tou)；酶標工作(zuo)液、樣(yang)本(ben)稀(xi)釋液和底(di)物等公(gong)共(gong)組(zu)分(fen)，要(yao)懸(xuan)臂加樣(yang)，不(bu)得碰到(dao)微孔；不得重復(fu)使(shi)用(yong)封板(ban)膜。
8、試劑(ji)盒(he)保(bao)質期內使(shi)用(yong)，不同批(pi)號的試劑(ji)不(bu)得混用。
9、底(di)物B對光敏(min)感(gan)，避(bi)免長時(shi)間暴(bao)露(lu)於(yu)光下。
【雞(ji)凝血因(yin)子(zi)V(F5)ELISA檢(jian)測試劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)程序(xu)總結】