本(ben)生詳解抗體(ti)的制(zhi)備(bei)方(fang)法與原理

　　抗血清(qing)的制(zhi)備

　　有(you)了質(zhi)量(liang)好(hao)的(de)抗原，還必須選(xuan)擇(ze)適當(dang)的免疫(yi)途徑(jing)，才能(neng)產生(sheng)質量(liang)好(hao)(特(te)異性(xing)強(qiang)和效價高(gao))的(de)抗體(ti)。

　　(壹)用於免(mian)疫(yi)的動(dong)物

　　作免(mian)疫(yi)用的動(dong)物有(you)哺乳(ru)類和禽(qin)類(lei)，主要(yao)為羊、馬、家兔(tu)、猴、豬、豚鼠(shu)、雞(ji)等，實(shi)驗(yan)室(shi)常用者(zhe)為(wei)家兔(tu)、山羊和豚鼠(shu)等。動(dong)物種類的選(xuan)擇(ze)主要(yao)根據抗原的生物學特性(xing)和所要(yao)獲得抗(kang)血(xue)清(qing)數(shu)量(liang)，如般制(zhi)備(bei)抗r-免疫(yi)球蛋(dan)白(bai)抗(kang)血(xue)清(qing)，多用家兔(tu)和山羊，因(yin)動(dong)物反應(ying)良(liang)好(hao)，而(er)且能夠(gou)提(ti)供(gong)足(zu)夠(gou)數(shu)量(liang)的血(xue)清(qing)，用於免(mian)疫(yi)的動(dong)物應(ying)適(shi)齡，健(jian)壯(zhuang)，無(wu)感染(ran)性(xing)疾(ji)患，-好(hao)為(wei)雄性(xing)，此外還(hai)需(xu)十(shi)分註意動物的飼養(yang)，以(yi)消(xiao)除(chu)動物的個(ge)體(ti)差(cha)異(yi)以(yi)及在(zai)免疫(yi)過程中死亡(wang)的影響。若用兔(tu)，-好(hao)用純種(zhong)新(xin)西(xi)蘭兔(tu)，組三只(zhi)，兔(tu)的體重(zhong)以(yi)2～3kg為(wei)宜。

　　(二)免疫(yi)途徑(jing)

　　免疫(yi)途徑(jing)有(you)多種(zhong)多樣，如靜(jing)脈內(nei)、腹腔(qiang)內(nei)、肌肉內(nei)、皮內(nei)、皮下、淋巴(ba)結(jie)內(nei)註射等，般(ban)常用皮下(xia)或背(bei)部多(duo)點(dian)皮(pi)內(nei)註射，每(mei)點(dian)註射0.1ml左右。途徑(jing)的選(xuan)擇(ze)決(jue)定於抗(kang)原的生物學特性(xing)和理化特性(xing)，如激(ji)素(su)、酶(mei)、毒素(su)等生(sheng)物學活性(xing)抗原，般不宜(yi)采用靜(jing)脈註射。

　　(三)佐劑(ji)

　　由於(yu)不同(tong)個(ge)體(ti)對同抗原的反應(ying)性(xing)不同(tong)，而(er)且不同(tong)抗(kang)原產生免疫(yi)反應(ying)的(de)能力(li)也有(you)強(qiang)有(you)弱，因(yin)此常常在註射抗原的同時(shi)，加入(ru)能增強(qiang)抗(kang)原的抗原性(xing)物質，以(yi)刺(ci)激(ji)機體(ti)產生較強(qiang)的(de)免疫(yi)反應(ying)，這(zhe)種物質稱(cheng)為(wei)免疫(yi)佐劑(ji)。

　　佐劑(ji)除(chu)了延長(chang)抗原在體內(nei)的存留時(shi)間，增加抗原刺(ci)激(ji)作用外，更(geng)主要(yao)的是，它能(neng)刺(ci)激(ji)網(wang)狀(zhuang)內(nei)皮系統(tong)，使參(can)與免疫(yi)反應(ying)的(de)免疫(yi)活性(xing)細胞(bao)增多，促進(jin)T細胞(bao)與B細胞(bao)的(de)相互(hu)作用，從(cong)而(er)增強(qiang)機體(ti)對抗原的細胞(bao)免(mian)疫(yi)和抗體(ti)的產生(sheng)。

　　常用的佐(zuo)劑(ji)是福氏佐(zuo)劑(ji)(Freund adjuvant),其成分通常是羊毛(mao)脂(zhi)1份(fen)、石臘油(you)5份，羊毛(mao)脂(zhi)與石臘油(you)的比例(li)，視(shi)需要(yao)可(ke)調(tiao)整為(wei)1：2～9(V/V)，這(zhe)是不*福氏佐(zuo)劑(ji)，在每(mei)毫(hao)升(sheng)不*佐(zuo)劑(ji)加入(ru)1～20mg卡(ka)介(jie)苗就成為*佐劑(ji)。

　　配(pei)制(zhi)方(fang)法：按(an)比例(li)將羊毛(mao)脂(zhi)與石蠟油(you)置(zhi)容器內(nei)，用超聲(sheng)波(bo)使之(zhi)混勻，高(gao)壓(ya)滅菌(jun)，置(zhi)4℃下保(bao)存備用。免疫(yi)取(qu)等容(rong)積(ji)*或不*佐(zuo)劑(ji)與免疫(yi)原溶液混合(he)，用振蕩(dang)器混勻成乳狀(zhuang)，也可(ke)以(yi)在(zai)免疫(yi)取(qu)需要量(liang)佐劑(ji)置(zhi)乳缽中(zhong)研磨，均勻後再邊磨邊滴(di)加入(ru)等容(rong)積(ji)抗原液(其中加卡(ka)介(jie)苗3～4mg/ml或(huo)不加)，加完後再繼續研(yan)磨成乳劑(ji)，滴(di)於(yu)冰水上5～10min內(nei)*不擴散(san)為(wei)止(zhi)。為(wei)避免損失(shi)抗(kang)原，亦可用註射器裝抗原液，另註射器裝佐劑(ji)，二者(zhe)以(yi)聚(ju)乙(yi)烯(xi)塑(su)料管(guan)連接(jie)，然後二者(zhe)來(lai)回(hui)反復抽(chou)吸(xi)，約數(shu)十(shi)分鐘(zhong)後即(ji)能(neng)*乳(ru)化。檢查(zha)合(he)格後即(ji)以(yi)其(qi)中註射器作註射用。

　　(四(si))免疫(yi)方法

　　抗(kang)原劑(ji)量(liang)，次劑(ji)量(liang)為300～500μg，加強(qiang)免(mian)疫(yi)的劑(ji)量(liang)約為次劑(ji)量(liang)為1/4左(zuo)右。每(mei)2～3周(zhou)加強(qiang)免(mian)疫(yi)次。加強(qiang)免(mian)疫(yi)時(shi)用不*佐(zuo)劑(ji)，次免(mian)疫(yi)時(shi)皮(pi)下(xia)註射百日咳疫(yi)苗0.5ml，加強(qiang)免(mian)疫(yi)時(shi)不必(bi)註射百日咳疫(yi)苗。

　　在(zai)第(di)2次(ci)加強(qiang)免(mian)疫(yi)後2周，從(cong)耳(er)緣靜(jing)脈取(qu)2～3ml血，制備(bei)血清(qing)，檢測(ce)抗體(ti)效(xiao)價(見後)。如未達(da)到(dao)預期效(xiao)價，需(xu)再進(jin)行加強(qiang)免(mian)疫(yi)，直到(dao)滿意時(shi)為(wei)止(zhi)(圖(tu)2-3)。當(dang)抗體效價達(da)到(dao)預期水平時(shi)，即(ji)可(ke)放(fang)血制備(bei)抗血清(qing)。

　　抗體(ti)的制備方法與原理先和大(da)家(jia)介(jie)紹到(dao)這(zhe)，如果想(xiang)要了解更多(duo)抗體(ti)的(de)信(xin)息(xi)，可以(yi)關(guan)註天(tian)津本(ben)生生(sheng)物，本(ben)生業給生(sheng)物醫藥客(ke)戶提(ti)供(gong)生物實(shi)驗(yan)室(shi)檢測(ce)耗材(cai),試(shi)劑(ji)，歡迎(ying)廣(guang)大(da)客(ke)戶來(lai)詢(xun)。