使用ELISA檢(jian)測試劑盒(he)進行試驗時，應分別(bie)以(yi)陽(yang)性對照(zhao)與(yu)陰性對照(zhao)控制(zhi)試驗條(tiao)件，待檢(jian)樣品(pin)應作(zuo)壹(yi)式(shi)二(er)份(fen)，以(yi)保(bao)證(zheng)實(shi)驗(yan)結(jie)果的準(zhun)確(que)性。有(you)時本底較高，說(shuo)明(ming)有(you)非特(te)異性反(fan)應。

　　在ELISA中(zhong)，進行各項(xiang)實(shi)驗條(tiao)件的選(xuan)擇(ze)是(shi)很(hen)重(zhong)要(yao)的，其中(zhong)包(bao)括(kuo)：

　　固(gu)相載體(ti)的選(xuan)擇(ze)：許(xu)多物質(zhi)可作(zuo)為(wei)固(gu)相載體(ti)，如聚(ju)氯乙烯(xi)、聚(ju)苯(ben)乙烯(xi)、聚(ju)丙(bing)酰胺和纖(xian)維(wei)素(su)等。其形(xing)式(shi)可以(yi)是(shi)凹孔平(ping)板(ban)、試管(guan)、珠(zhu)粒等。目(mu)前(qian)常(chang)用的是(shi)40孔聚(ju)苯(ben)乙烯(xi)凹孔板(ban)。不(bu)管(guan)何(he)種載體(ti)，在使用前(qian)均可進行篩(shai)選(xuan)：用等量抗原(yuan)包(bao)被(bei)，在(zai)同(tong)壹(yi)實驗條件下進行反(fan)應，觀(guan)察其顯色反(fan)應是否均壹性，據此(ci)判明(ming)其吸附性能是(shi)否良(liang)好(hao)。

　　包(bao)被(bei)抗(kang)體(ti)(或(huo)抗原(yuan))的選(xuan)擇(ze)：將抗體(ti)(或(huo)抗原(yuan))吸附在固(gu)相載體(ti)表(biao)面(mian)時，要求純度(du)要好,吸附時壹般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫(wen)度(du)，時間及其蛋(dan)白量(liang)也(ye)有(you)壹(yi)定(ding)影響(xiang),壹般多采(cai)用4℃18～24小(xiao)時。蛋(dan)白質(zhi)包(bao)被(bei)的適(shi)濃(nong)度(du)需進行滴定(ding)：即用不(bu)同(tong)的蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包(bao)被(bei)後(hou)，在(zai)其它(ta)試驗條(tiao)件相同時，觀(guan)察陽性標本的OD值(zhi)。選擇(ze)OD值(zhi)大(da)而(er)蛋(dan)白量(liang)少(shao)的濃(nong)度(du)。對於多數蛋(dan)白質(zhi)來說(shuo)通常(chang)為(wei)1～10μg/ml。

　　除(chu)此(ci)之外(wai)還(hai)要(yao)註意以(yi)下(xia)事(shi)項(xiang)：

　　1.確(que)定(ding)ELISA檢(jian)測試劑盒(he)在有(you)效(xiao)期(qi)內(nei);

　　2.仔(zai)細(xi)閱讀(du)說(shuo)明(ming)書(shu);

　　3.按(an)說(shuo)明(ming)書(shu)確(que)定(ding)所有(you)試劑齊(qi)全(數(shu)量、體(ti)積);

　　4.標本制(zhi)備(bei)要規(gui)範，每(mei)份(fen)標本體(ti)積要按(an)2-3個(ge)復(fu)孔以(yi)上(shang)的量(liang)制(zhi)備(bei)，盡(jin)量(liang)分(fen)裝(zhuang)做備(bei)份(fen)。短期(qi)內(nei)無(wu)法實(shi)驗者(zhe)，註意低溫(wen)保(bao)存(cun);

　　5.根(gen)據(ju)檢(jian)測標本數量(liang)確(que)定(ding)所需試劑的量(liang);

　　6.準(zhun)備(bei)好所有(you)實(shi)驗(yan)額(e)外(wai)所需物品(pin)，如試管(guan)、吸頭(tou)、移液器、離(li)心機(ji)等;

　　7.按(an)說(shuo)明(ming)書(shu)將所用試劑平(ping)衡(heng)至(zhi)室溫(wen)，配制(zhi)所需試劑。